论文部分内容阅读
目的:探讨大鼠脊髓缺血再灌注损伤过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)调控脊髓神经元凋亡的具体机制.方法:42只SD大鼠随机分为假手术组(A组,6只)、缺血再灌注组(B组,18只)和iNOS抑制组(C组,18只).A组动物麻醉后仅腹腔切开,B组及C组采用腹主动脉阻断法(夹闭腹主动脉1h后松开,再灌注6、12、24 h)建立脊髓缺血再灌注损伤模型.手术后,A组及B组动物按5 ml/kg腹腔注射5％二甲基亚砜,C组动物按150 mg/kg腹腔注射同等量氨基胍.Tarlov运动功能评分法评估三组大鼠的后肢运动功能.取腰段脊髓组织,透射电镜观察脊髓神经细胞形态学变化,神经元特异性抗体NeuN免疫荧光计算各组脊髓组织中存话神经元数目,Western blot检测iNOS、Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bcl-xL/Bcl-2 associated death promoter,BAD)、磷酸化BAD(p-BAD)、14-3-3及细胞色素C的表达,免疫共沉淀检测BAD与14-3-3的结合状态.结果:Tarlov运动功能评分显示A组大鼠后肢运动功能无损害,B组和C组大鼠后肢功能明显损害,但C组大鼠后肢功能好于B组(P＜0.05).NeuN免疫荧光结果显示B组和C组大鼠脊髓神经元数目明显减少,但C组大鼠脊髓神经元数目多于B组(P＜0.05).电镜结果示B组及C组中脊髓组织均有明显凋亡现象,但C组大鼠凋亡程度较轻.Western blot结果表明iNOS和细胞色素C表达量在B组及C组中随再灌注时间延长而增加,但相同再灌注时间C组表达强度明显弱于B组(P＜ 0.05);p-BAD表达量则随着灌注时间延长而下降,但C组中下降程度明显小于B组(P＜0.05).免疫共沉淀结果表明:BAD与14-3-3结合力随着再灌注时间的延长在B组和C组中逐渐降低,但是C组程度更慢(P＜0.05).结论:脊髓缺血再灌注过程中,iNOS通过促进pBAD去磷酸化,降低BAD与14-3-3的结合力,进而诱发脊髓神经元的凋亡.