探讨护骨素(OPG)对软脂酸诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及可能机制。
方法将HUVECs细胞分为3组：正常对照组：以0.4%牛血清白蛋白处理；软脂酸组：以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组：以不同浓度OPG预处理24 h，再加入0.4 mmol/L软脂酸(OPG浓度分别为50、100、200、400 μg/L)，以上各组细胞培养24 h，流式细胞术及Hoechst 33258核染色检测细胞凋亡。将HUVECs细胞分为5组：正常对照组：以0.4%牛血清白蛋白处理；软脂酸组：以0.4 mmol/L软脂酸处理；OPG组：以400 μg/L OPG预处理24 h，再加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸＋OPG＋雷帕霉素组：以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h，再给予400 μg/L OPG处理24 h，最后加入0.4 mmol/L软脂酸；软脂酸＋雷帕霉素组：以10 μg/L雷帕霉素预处理24 h，再加入0.4 mmol/L软脂酸。以Western blotting法分析各组HUVECs细胞马铃薯球蛋白(tuberin)、磷酸化马铃薯球蛋白(P-tuberin)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)、磷酸化核糖体蛋白S6激酶(P-S6K)、Bcl-2、Bax以及caspase 3蛋白表达水平。组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK法。
结果与正常对照组比较，软脂酸组早期细胞凋亡率显著增加(18.31%±0.51%比6.88%±0.60%，P<0.05)；OPG组早期凋亡率(12.58%±0.19%、9.39%±0.42%、7.55%±0.17%、5.90%±0.14%)明显低于软脂酸组(均P<0.05)，且呈OPG剂量依赖性；与正常对照组比较，软脂酸组晚期凋亡率显著增加(9.55%±0.22%比5.28%±0.90%，P<0.05)；OPG组晚期凋亡率(7.71%±0.17%、6.42%±0.18%、5.24%±0.16%、4.50%±0.16%)明显低于软脂酸组(均P<0.05)，且呈OPG剂量依赖性。与正常对照组比较，软脂酸组P-tuberin/tuberin(2.0942±0.0163比1.1948±0.0541)、P-S6K/S6K(2.0942±0.0163比3.2052±0.0051)、Bax/β-actin(0.3868±0.0013比1.2991±0.0026)、caspase 3/β-actin(0.2346±0.0009比0.5793±0.0103)表达水平均显著提高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，Bcl-2/β-actin表达显著降低(0.2470±0.0038比0.0716±0.0004，P<0.05)；OPG组P-tuberin/tuberin(0.8258±0.0074)、P-S6K/S6K(2.5073±0.1403)、Bax/β-actin(0.7452±0.0045)、caspase 3/β-actin(0.4713±0.0066)表达水平明显低于软脂酸组(均P<0.05)，Bcl-2/β-actin(0.1909±0.0021)表达明显高于软脂酸组(P<0.05)。
结论OPG对软脂酸诱导的HUVECs凋亡具有保护作用，此作用可能通过下调tuberin/mTOR活性，增加Bcl-2表达、降低Bax及Caspase 3表达实现的。