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【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒（NDV）和禽肺炎病毒（APV）的二重RT-PCR，为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据GenBank已发表NDV的F基因序列（GenBank登录号JX840454）和APV的F基因序列（GeneBank登录号AF187154）分别设计2对特异性引物，应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR，对扩增条件进行优化，并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参