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目的:制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)菌毛蛋白FlaA卵黄免疫球蛋白(yolk immunoglobulin,IgY),并进行体外抑菌实验,为治疗H.pylori口服药物的研发奠定基础.方法:采用原核表达制备的FlaA蛋白,将重组FlaA菌毛蛋白免疫蛋鸡获取FlaA IgY,采用间接ELISA的方法检测FlaA IgY的效价.通过将其与肠道中常见菌群乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌进行抗体抗原结合反应,检测其是否与肠道中其他菌群存在交叉反应.评价0.1、1、5 mg/mL低、中、高3种不同浓度的FlaA IgY的体外抑菌实验效果.结果:纯化后的FlaA蛋白浓度为2.97 mg/mL.经重组FlaA IgY免疫制备IgY在第3次免疫1 wk后效价可达到1∶12800,特异性检测结果显示,FlaA IgY不与肠道中常见菌发生交叉反应,与H.pylori全菌和重组FlaA反应强烈.体外抑菌结果显示,0.1、1、5 mg/mL的FlaA IgY处理后的H.pylori菌液浓度与对照组菌液浓度相比具有显著差异(0.324±0.033,0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.539±0.023,P<0.01),表明低、中、高3组浓度的FlaA IgY均能一定程度的抑制H.pylori的生长.0.1 mg/mL IgY的抑菌作用主要表现在1-6 h之间,6 h后抑菌作用基本丧失.1 mg/mL FlaA IgY处理组的H.pylori在1-24 h之间生长较为缓慢,5 mg/mL FlaA IgY处理组菌液浓度在1-24 h之间基本无变化.108 CFU/mL H.pylori经3组不同浓度FlaA IgY处理24h后,低IgY浓度组菌液浓度与其余2组菌液浓度相比差异显著(0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.324±0.033,P<0.01),5 mg/mL FlaA IgY在24 h内能彻底抑制H.pylori的生长.结论:制备的FlaA IgY效价较高,特异性强,不与肠道常见菌群发生交叉反应.5 mg/mL的FlaA IgY在体外对H.pylori具有很强的抑制作用.