【摘 要】
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目的 验证幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)粘附素HpaA通过诱导T细胞分泌IL-21加剧其感染后促进胃粘膜损伤及胃癌转移的作用. 方法 收集56例确诊Hp感染患者临床内窥镜取得
【机 构】
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皖南医学院第二附属医院基础实验室,安徽芜湖241000;皖南医学院护理学院;皖南医学院第二附属医院基础实验室,安徽芜湖,241000;皖南医学院第二附属医院消化科;芜湖市第二人民医院消化科
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目的 验证幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)粘附素HpaA通过诱导T细胞分泌IL-21加剧其感染后促进胃粘膜损伤及胃癌转移的作用. 方法 收集56例确诊Hp感染患者临床内窥镜取得的胃粘膜,以及经根治后再次通过内窥镜取得胃粘膜,通过RT-PCR和Western blot比较其IL-21、MMP-2、MMP-9及其基因在Hp感染前后胃粘膜中的表达水平,并克隆构达、纯化粘附素HpaA.取健康未感染成年人外周血PBMC,磁珠分选获得CD3+T细胞.使用重组HpaA刺激分选获得的细胞,采用ELISA试剂盒检测其上清中IL-21的水平.培养胃粘膜AGS细胞系并使用不同手段干预培养环境中的IL-21水平,采用Western blot检测AGS细胞MMP-2及MMP-9的表达.并通过Transwell实验验证IL-21对AGS细胞迁徙的影响. 结果 Western blot检测Hp感染患者的胃粘膜中IL-21,MMP-2和MMP-9表达水平显著高于根治后的胃粘膜(P<0.05).成功构建pET-28a/HpaA重组质粒,表达并纯化的粘附素HpaA能诱导CD3+T细胞分泌高水平的IL-21.AGS细胞试验显示,IL-21诱导AGS细胞MMP-2及MMP-9的表达水平显著升高;使用抗体阻断IL-21以及使用适配子HA6(之前报道的能够特异性结合HpaA的配基)阻断HpaA后MMP 2及MMP-9的表达水平显著下降,且AGS细胞迁徙水平降低. 结论 粘附素HpaA通过诱导T细胞产生IL-21,继而通过MMP对促进胃粘膜损伤及胃癌转移有重要意义.
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