【摘 要】
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为探讨诱导温度对于HIV-1 Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30℃和37℃诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复
【机 构】
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中国疾病预防控制中心,性病艾滋病预防控制中心,传染病防治国家重点实验室,北京,100050
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为探讨诱导温度对于HIV-1 Gag在大肠杆菌中表达产物状态以及尿素浓度对蛋白纯化效果的影响,将30℃和37℃诱导表达的包涵体分别溶于不同浓度的尿素,比较溶解性的差异,并比较复性的不同.将30℃诱导的目的蛋白分别用2 mol/L和8 mol/L尿素溶解后做层析分离,比较两者的分离效果.结果发现,与37℃相比,30℃诱导表达的蛋白能有效溶于低浓度尿素.并且更容易复性.与8 mol/L尿素溶解相比,30℃诱导的包涵体用2 mol/L尿素溶解后通过凝胶过滤和离子交换层析纯化能得到更好的分离效果.这提示低温诱导的Gag包涵体中可能含有更多类似天然态构象的蛋白,而低浓度尿素有利于保持包涵体中蛋白的天然态构象.从而为包涵体蛋白的诱导表达和分离纯化提供了参考.
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