【摘 要】
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目的构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定。方法从人宫颈癌组织中扩增出TET1目的片段并将其克隆到pLVX-MYRF载体上,构建真核
【机 构】
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贵州医科大学,湖北医药学院附属太和医院,贵州医科大学附属医院
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81602297）, 贵州省科技计划项目（黔科合基础2016-1121）
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目的构建甲基胞嘧啶双加氧酶1(TET1)过表达载体并对其稳定过表达的宫颈癌HeLa细胞进行鉴定。方法从人宫颈癌组织中扩增出TET1目的片段并将其克隆到pLVX-MYRF载体上,构建真核表达载体pLVX-MYRF-TET1,进行双酶切及测序验证。选择宫颈癌HeLa细胞,随机分为TET1组、阴性对照组,采用脂质体转染法分别转染重组质粒pLVX-MYRF-TET1、空质粒pLVX-MYRF,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测两组TET1 mRNA和蛋白表达。结果经双酶切分析及测序验证,成功构建了真核表达载体pLVX-MYRF-TET1。与阴性对照组比较,TET1组TET1 mRNA和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论成功构建TET1过表达载体pLVX-MYRF-TET1,并且能在宫颈癌HeLa细胞中稳定过表达。
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