康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT—PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶I(cbhI)基因。cbhl基因经测序确认后克隆到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白。实验结果:cbhI基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.
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