观察12/15-脂氧酶反义寡核苷酸(asON-12/15-LOX)在体外培养皮质神经元中对氧糖剥夺损伤(OGD)诱导的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达和核移位的影响。
方法体外原代培养SD大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、氧糖剥夺损伤组、干预组,其中正常对照组5皿神经元、氧糖剥夺损伤组9皿神经元、干预组5皿神经元。制作体外培养皮质神经元氧糖剥夺3 h再灌注24 h损伤模型(OGD),干预组12/15-LOX反义寡核苷酸预处理48 h后,给予OGD处理。分别采用Western印迹法和免疫荧光染色法检测12/15-LOX和PPARγ的改变。
结果(1)Western印迹和免疫荧光检测显示,与正常对照组(0.25±0.14)相比,OGD组(1.73±0.78)12/15-LOX蛋白表达增加(t=–3.72,P=0.03)。Western印迹检测显示,与OGD组(1.32±0.20)相比,12/15-LOX反义寡核苷酸干预组(0.81±0.02)12/15-LOX蛋白表达降低(t=5.03,P=0.02)。差异均有统计学意义。(2)Western印迹和免疫荧光检测显示,与正常对照组(0.43±0.14)相比,OGD组(2.63±0.63)PPARγ总蛋白表达增加(t=–6.79,P=0.04);与正常对照组(0.41±0.17)相比,OGD组(2.60±0.93)PPARγ核蛋白表达增加(t=–4.67,P=0.02);与正常对照组(1.88±0.79)相比,OGD组(0.50±0.21)PPARγ浆蛋白表达降低(t=3.40,P=0.04)(即核移位增加)。差异均有统计学意义。(3)Western印迹和免疫荧光检测显示,与OGD组(0.23±0.08)相比,12/15-LOX反义寡聚核苷酸组(0.11±0.03)PPARγ总蛋白水平降低(t=2.83,P=0.04)。与OGD组(2.58±0.60)相比,12/15-LOX反义寡聚核苷酸组(0.44±0.10)PPARγ核蛋白表达水平降低(t=7.05,P=0.01);与OGD组(0.18±0.11)相比,12/15-LOX反义寡聚核苷酸组(2.78±0.94)PPARγ浆蛋白表达水平增加(t=–5.47,P=0.01)(即核移位抑制)。差异均具有统计学意义。
结论12/15-LOX反义寡核苷酸抑制OGD诱导的体外培养皮质神经元PPARγ表达和核移位。