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[摘要] 目的 了解adeFGH系统在鲍曼不动杆菌的多重耐药中发挥的作用。 方法 收集20株鲍曼不动杆菌耐药株（含10株多重耐药株），采用实时荧光定量PCR检测adeFGH外排系统编码基因adeF、adeG和adeH的mRNA表达水平，结合其耐药谱，分析adeF、adeG和adeH的mRNA表达与鲍曼不动杆菌耐药之间的关系。 结果 A、B和C组鲍曼不动杆菌的adeF基因和adeG基因的mRNA的表达水平在各组之间无明显差异（P>0.05）；adeH基因的mRNA表达水平在A组和B组之间无明显差异，A组和B组的adeH基因的mRNA表达水平明显高于C组（P<0.05）。 结论 adeF、adeG、adeH基因共表达时，鲍曼不动杆菌adeFGH外排系统才能形成有效的抗生素外排通道；AdeFGH外排系统针对的外排底物有其局限性，主要针对氟喹诺酮类、β-内酰胺类以及β-内酰胺酶抑制剂等药物。
[关键词] 鲍曼不动杆菌；主动外排泵；多重耐药；adeFGH；mRNA表达
[中图分类号] R378 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）32-0005-03
Study on the mRNA expression of active efflux system gene adeFGH of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii
ZHANG Kaihua1 ZUO Lingling1 XU Xin1 WANG Yongdong2
1.Department of Blood Transfusion， the Second Affiliated Hospital， University of South China， Hengyang 421001， China； 2.University of South China， Hengyang 421001， China
[Abstract] Objective To understand the role of the adeFGH system in multi-drug resistance of Acinetobacter baumannii. Methods A total of 20 Acinetobacter baumannii resistant strains（including 10 multi-drug resistant strains） were collected. Real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA expression levels of the encoding genes of adeF， adeG and adeH in adeFGH efflux system. The relationship between mRNA expression of adeF， adeG and adeH and Acinetobacter baumannii resistance was analyzed in combination with its drug resistance spectrum. Results The mRNA expression levels of adeF gene and adeG gene of Acinetobacter baumannii in group A， B and C were not significantly different among groups（P>0.05）； the mRNA expression level of adeH gene was not significantly different between group A and group B. The mRNA expression levels of adeH gene in group A and group B were significantly higher than those in group C（P<0.05）. Conclusion When the adeF， adeG and adeH genes are co-expressed， the adeFGH efflux system of Acinetobacter baumannii can form an effective antibiotic efflux channel； the adeFGH efflux system has its limitations for efflux substrates， mainly for fluoroquinolones， β-lactams， and β-lactamase inhibitors.
[Key words] Acinetobacter baumannii； Active efflux pump； Multi-drug resistance； adeFGH； mRNA expression
抗生素的出現极大地推动了现代医学的发展[1]。但是，随着抗生素的广泛和长期的使用，产生了耐药菌，且随着抗生素的持续滥用，出现了多重耐药菌，这进一步加大了治疗的难度[2，3]。统计表明，目前，全世界每年因抗生素耐药而导致死亡的人数已达70万，预计到2050年将达到100万[4]。
鲍曼不动杆菌是一种非发酵革兰阴性条件致病菌，能引起多种院内感染，可能引起严重的后果，且鲍曼不动杆菌极易产生耐药。在世界卫生组织公布的对人类危害最大的耐药菌中，耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌位列第1位[5]。目前，鲍曼不动杆菌的耐药率达89.6%，而对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达62.8%和59.4%[6]。 结果同时表明，鲍曼不动杆菌的adeFGH的过表达可降低其对氟喹诺酮类、β-内酰胺类以及β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂等多种药物的敏感性，但对氨基糖苷类和复方新诺明未造成明显影响。而黄阿莉等[15]的研究表明，临床分离出的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类和复方新诺明的耐药率分别达到了50.41%和78.13%。这进一步说明，鲍曼不动杆菌存在多种耐药机制，adeFGH外排系统针对的外排底物有其局限性。
综上，本研究表明鲍曼不动杆菌adeFGH外排系统要形成有效的抗生素外排通道，需要adeF、adeG、adeH基因共表达，且鲍曼不动杆菌的adeFGH外排系统针对的外排底物有其局限性，主要针对氟喹诺酮类、β-内酰胺类以及β-内酰胺酶抑制剂等药物。
[参考文献]
[1] 刘昌孝. 当代抗生素发展的挑战与思考[J]. 中国抗生素杂志，2017，42（1）：1-12.
[2] Duin DV，Paterson D. Multidrug resistant bacteria in the community：Trends and lessons learned[J]. Infectious Disease Clinics of North America，2016，30（2）：377-390.
[3] 刘璐璐，牟作峰，杨会香，等. 重症监护病房多重耐药菌感染的现状及综合干预对策[J]. 护理研究，2015，（2）：144-147.
[4] Shankar PR. Book review：Tackling drug-resistant infections globally[J]. Arch Pharma Pract，2016，7（3）：110-111.
[5] Willyard C. The drug-resistant bacteria that pose the greatest health threats[J]. Nature，2017，543（7643）：15.
[6] Zhao SY，Jiang DY，Xu PC，et al. An investigation of drug-resistant Acinetobacter baumannii，infections in a comprehensive hospital of East China[J]. Annals of General Psychiatry，2015，14（1）：7-13.
[7] Modarresi F，Azizi O，Shakibaie MR，et al. Effect of iron on expression of efflux pump（adeABC）and quorum sensing （luxI，luxR） genes in clinical isolates of Acinetobacter baumannii[J]. Apmis，2015， 123（11）：959-968.
[8] Zhibin L，Yumei C，Yufan C，et al. RND efflux pump and its interrelationship with quorum sensing system[J]. Hereditas，2016，38（10）：894-901.
[9] Ranaweera I，Shrestha U，Ranjana KC，et al. Structural comparison of bacterial multidrug efflux pumps of the major facilitator superfamily[J]. Trends Cell Mol Biol，2015，10：131-140.
[10] 申晓冬. 外排泵介导鲍曼不动杆菌耐药性的研究进展[J].微生物学免疫学进展，2012，40（3）：73-78.
[11] Yoon EJ，Chabane YN，Goussard S，et al. Contribution of resistance-nodulation-cell division efflux systems to antibiotic resistance and biofilm formation in acinetobacter baumannii[J]. Mbio， 2015，6（2）：3983.
[12] Coyne S，Rosenfeld N，Lambert T，et al. Overexpression of resistance-nodulation-cell division pump adeFGH confers multidrug resistance in acinetobacter baumannii[J].Antimicrobial Agents
[关键词] 鲍曼不动杆菌；主动外排泵；多重耐药；adeFGH；mRNA表达
[中图分类号] R378 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）32-0005-03
Study on the mRNA expression of active efflux system gene adeFGH of multi-drug resistant Acinetobacter baumannii
ZHANG Kaihua1 ZUO Lingling1 XU Xin1 WANG Yongdong2
1.Department of Blood Transfusion， the Second Affiliated Hospital， University of South China， Hengyang 421001， China； 2.University of South China， Hengyang 421001， China
[Abstract] Objective To understand the role of the adeFGH system in multi-drug resistance of Acinetobacter baumannii. Methods A total of 20 Acinetobacter baumannii resistant strains（including 10 multi-drug resistant strains） were collected. Real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA expression levels of the encoding genes of adeF， adeG and adeH in adeFGH efflux system. The relationship between mRNA expression of adeF， adeG and adeH and Acinetobacter baumannii resistance was analyzed in combination with its drug resistance spectrum. Results The mRNA expression levels of adeF gene and adeG gene of Acinetobacter baumannii in group A， B and C were not significantly different among groups（P>0.05）； the mRNA expression level of adeH gene was not significantly different between group A and group B. The mRNA expression levels of adeH gene in group A and group B were significantly higher than those in group C（P<0.05）. Conclusion When the adeF， adeG and adeH genes are co-expressed， the adeFGH efflux system of Acinetobacter baumannii can form an effective antibiotic efflux channel； the adeFGH efflux system has its limitations for efflux substrates， mainly for fluoroquinolones， β-lactams， and β-lactamase inhibitors.
[Key words] Acinetobacter baumannii； Active efflux pump； Multi-drug resistance； adeFGH； mRNA expression
抗生素的出現极大地推动了现代医学的发展[1]。但是，随着抗生素的广泛和长期的使用，产生了耐药菌，且随着抗生素的持续滥用，出现了多重耐药菌，这进一步加大了治疗的难度[2，3]。统计表明，目前，全世界每年因抗生素耐药而导致死亡的人数已达70万，预计到2050年将达到100万[4]。
鲍曼不动杆菌是一种非发酵革兰阴性条件致病菌，能引起多种院内感染，可能引起严重的后果，且鲍曼不动杆菌极易产生耐药。在世界卫生组织公布的对人类危害最大的耐药菌中，耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌位列第1位[5]。目前，鲍曼不动杆菌的耐药率达89.6%，而对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别达62.8%和59.4%[6]。 结果同时表明，鲍曼不动杆菌的adeFGH的过表达可降低其对氟喹诺酮类、β-内酰胺类以及β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂等多种药物的敏感性，但对氨基糖苷类和复方新诺明未造成明显影响。而黄阿莉等[15]的研究表明，临床分离出的鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类和复方新诺明的耐药率分别达到了50.41%和78.13%。这进一步说明，鲍曼不动杆菌存在多种耐药机制，adeFGH外排系统针对的外排底物有其局限性。
综上，本研究表明鲍曼不动杆菌adeFGH外排系统要形成有效的抗生素外排通道，需要adeF、adeG、adeH基因共表达，且鲍曼不动杆菌的adeFGH外排系统针对的外排底物有其局限性，主要针对氟喹诺酮类、β-内酰胺类以及β-内酰胺酶抑制剂等药物。
[参考文献]
[1] 刘昌孝. 当代抗生素发展的挑战与思考[J]. 中国抗生素杂志，2017，42（1）：1-12.
[2] Duin DV，Paterson D. Multidrug resistant bacteria in the community：Trends and lessons learned[J]. Infectious Disease Clinics of North America，2016，30（2）：377-390.
[3] 刘璐璐，牟作峰，杨会香，等. 重症监护病房多重耐药菌感染的现状及综合干预对策[J]. 护理研究，2015，（2）：144-147.
[4] Shankar PR. Book review：Tackling drug-resistant infections globally[J]. Arch Pharma Pract，2016，7（3）：110-111.
[5] Willyard C. The drug-resistant bacteria that pose the greatest health threats[J]. Nature，2017，543（7643）：15.
[6] Zhao SY，Jiang DY，Xu PC，et al. An investigation of drug-resistant Acinetobacter baumannii，infections in a comprehensive hospital of East China[J]. Annals of General Psychiatry，2015，14（1）：7-13.
[7] Modarresi F，Azizi O，Shakibaie MR，et al. Effect of iron on expression of efflux pump（adeABC）and quorum sensing （luxI，luxR） genes in clinical isolates of Acinetobacter baumannii[J]. Apmis，2015， 123（11）：959-968.
[8] Zhibin L，Yumei C，Yufan C，et al. RND efflux pump and its interrelationship with quorum sensing system[J]. Hereditas，2016，38（10）：894-901.
[9] Ranaweera I，Shrestha U，Ranjana KC，et al. Structural comparison of bacterial multidrug efflux pumps of the major facilitator superfamily[J]. Trends Cell Mol Biol，2015，10：131-140.
[10] 申晓冬. 外排泵介导鲍曼不动杆菌耐药性的研究进展[J].微生物学免疫学进展，2012，40（3）：73-78.
[11] Yoon EJ，Chabane YN，Goussard S，et al. Contribution of resistance-nodulation-cell division efflux systems to antibiotic resistance and biofilm formation in acinetobacter baumannii[J]. Mbio， 2015，6（2）：3983.
[12] Coyne S，Rosenfeld N，Lambert T，et al. Overexpression of resistance-nodulation-cell division pump adeFGH confers multidrug resistance in acinetobacter baumannii[J].Antimicrobial Agents