【摘 要】
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目的以双氯芬酸为探针药,建立HPLC测定大鼠肝微粒体CYP2C9酶活性的方法,并对其进行动力学考察。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱;流动相为乙腈-水-0.1%三氟乙酸,梯度洗
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目的以双氯芬酸为探针药,建立HPLC测定大鼠肝微粒体CYP2C9酶活性的方法,并对其进行动力学考察。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱;流动相为乙腈-水-0.1%三氟乙酸,梯度洗脱;流速为1 mL·min-1;柱温30℃;检测波长为278 nm。大鼠肝微粒体加入双氯芬酸钠孵育30 min后,用盐酸和乙酸乙酯终止反应,加入内标地西泮,涡旋后高速离心,取上层有机相吹干复溶进样检测;以Lineweaver-Burk作图计算Km和Vmax。结果双氯芬酸、4-羟基双氯芬酸和内标分离良好且无内源性干扰。4-羟基双氯芬酸浓度在0.05~10μmol·L-1内线性关系良好(r=0.999 8),定量下限为0.05μmol·L-1;日内、日间精密度均<10%,回收率>75%。动力学考察表明选择盐酸和乙酸乙酯作为终止试剂效果良好,测得大鼠肝微粒体中双氯芬酸羟化反应的Km为26.87μmol·L-1,Vmax为2.359 nmol·min-1·mg-1 pro。结论该方法稳定,结果能准确反映CYP2C9酶的活性,可用于相关动力学研究。
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