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摘要：目的：观察“参七汤”对阿尔茨海默病（AD）大鼠模型行为学和抗氧化能力的影响（治疗作用）。方法：用水迷宫筛选正常大鼠50只，随机分为A组（空白组），B组（假手术组）、C组（模型组）、D组（脑复康组）、E组（参七汤组）、每组各10只。A组不做处理，B组海马内及腹腔注射生理盐水，C组、D组、E组利用腹腔注射D-Gal联合海马内注射 Aβ1-42制造AD模型，连续42天。D组以临床治疗AD的有效药脑复康作为西药对照灌胃治疗。E组参七汤 0.25g·kg-1·d-1灌胃治疗，连续21天。42天后，水迷宫测试，禁食，全麻下行腹主动脉采血，用ELISA测定大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果：与模型组相比，行为学方面治疗组（D、E）明显改善，且E组优于D组（P<0.05）；在降低血清MDA方面，治疗组（D、E）明显降低（P<0.01），且E组优于D组（P<0.05）；在提升大鼠海马内SOD含量方面，治疗组（D、E）含量明显提升（P<0.01），且E组优于D组，差别有意义（P<0.05）。结论：应用“参七汤”改善AD大鼠模型行为学和抗氧化能力效果比西药对照组较好。
关键词：阿尔茨海默病；中医药治疗；动物研究；
1 材料与方法
1.1实验动物 清洁级SD大鼠50只，雄性，体重200～250g，标准环境下饲养：温度23±0.5℃，自然光线，自由进食进水。（北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证编号为SCXK（京）2012-0001）；
1.2 试剂 Aβ1-42：美国Sigma公司， 1mg Aβ1-42溶于200μl人工脑脊液中，配成浓度为5mmol/L的溶液，0.22μm滤器过滤除菌，密封后置于37℃细胞培养箱中，96小时候即成凝聚态， 4℃保存备用。 D-Gal：上海生工生物，进口分装，溶于生理盐水中制成25%D-Gal溶液，过滤除菌，4℃保存。 SOD、MDA检测试剂盒购自上海哈灵生物科技有限公司。
1.3 仪器 Morris水迷宫系统：（北京硕林苑科技有限公司研制）； 大鼠脑立体定位仪（深圳瑞德生命科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 电动颅钻（北京硕林苑科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）； 超速离心机。
1.4 动物筛选、动物分组及模型制备
1.4.1动物筛选及实验分组
大鼠喂养5天使其适应环境后进行水迷宫学习训练。参照文献 [1]训练方法，实验前先将大鼠放置在平台上15秒钟，然后将大鼠面向水迷宫池壁，头朝下，沿水迷宫四个象限中点依次放入水池，令其游完60秒，然后引导大鼠至平台休息15秒，平台设在第一象限。依次游完4个象限为训练1次。每天训练一次，训练3次后，继续测试1次，超过2个象限在60秒内不能找到平台者视为智力异常，予以剔除。余下大鼠供实验用。随机分为5组：正常组、假手术组、模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组，每组10只。各组大鼠分别于术前、术后7d及术后28d进行Morris水迷宫测试。
1.4.2模型制备
大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，头部备皮，使其皮肤暴露，碘伏消毒，在后囟处沿矢状线切开皮肤，暴露颅骨，固定在脑立体定位仪上，依照包新民的《大鼠脑立体定位图谱》，确定双侧海马注射点：前囟后3.0mm，左右旁开2.0，硬脑膜下3.6mm。用电动颅转打孔，用微量进样器缓慢注射Aβ1-42 2μL（Aβ1-42 5μg）5min内注射完毕，留针5min后缝合伤口。模型组注射Aβ1-42，假手术组注入等量生理盐水，单笼饲养至大鼠完全清醒。然后大鼠连续7d皮下注射青霉素（10万单位/d），防止感染；同时模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组大鼠连续30d腹腔注射D-Gal50mg（kgd）-1，使其衰老。
1.5 处理方法 D、E组从造模开始后就进行治疗，每天早晨8：00～9：00灌胃给药，参七汤治疗组和脑复康治疗组给予灌胃，其他组给予等体积的纯净水灌胃，每天1次，持续21d。
1.6 指标测定
3 讨论
本研究通过腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上，双侧海马内注射Aβ1-42来制作AD模型，能引起大鼠学习记忆能力下降，并使神经组织中出现老年斑（SP）及神经原纤维缠结（NFT），是现在较为理想的阿尔茨海默病动物模型的复制方法。用Morris水迷宫来观察大鼠的学习记忆功能，用ELISA测定大鼠血清SOD活性和MDA含量。
AD在病理上可表现为SP及NFT，神经元数量减少，神经细胞中脂褐素增多。进行性认知功能减退是AD的主要临床特征，也是AD治疗学研究的主要目标。D-Gal可引起AD大鼠脑过氧化损害， D-Gal在半乳糖氧化酶的作用下生成了乙醛糖和过氧化氢，使活性氧变多，脂质过氧化亢进，超氧阴离子自由基增多，增多的自由基损害生物膜系统，还会影响核酸和蛋白质的代谢，使得神经细胞的转录水平降低，使蛋白质的合成减少，从而引起神经细胞结构的改变和功能退化[2-3]。SP是AD的重要病理学改变之一，Aβ是SP的主要成分，Aβ可能在AD发病中起到核心作用，可能是通过激活蛋白激酶，产生兴奋毒性药物以及氧自由基和氧化应激反应等，从而直接或间接引起AD的发生。SP及NFT是由于Aβ沉积所引起，最终导致记忆力减退和学习障碍等行为学的改变。脑内急性注射Aβ可使动物产生与AD相似的行为障碍、记忆缺损等症状，并出现Aβ沉积[3]。
SOD能特异性清除超氧化物阴离子自由基，减少脂质过氧化反应，防止活性氧的生成和蓄积，使机体细胞与组织免受损害[4-5]，是生物机体重要的抗氧化酶。SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力。MDA是机体非酶系统产生的自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应的终产物之一[6]，脂质过氧化作用通过链式或链式支链反应来放大活性氧的作用，损伤细胞。MDA的含量高低可间接反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度。 AD发病率逐年增高，已成为继心血管疾病和肿瘤后第三大危及人类生命健康的疾病。近年来临床上对于AD的治疗，，有许多新的精神活性药物被用于恢复AD病人的认知能力或避免其进一步减退以及提高他们的社会生活功能， 这些药物均能缓解AD患者的记忆与认知功能，，延缓病情进展，但无法阻止AD的疾病发展进程。中医在治疗AD上有它独特的方法和优势，故本实验在虚瘀致衰理论指导下，运用配伍参七汤，旨在认识中医学理论虚瘀致衰的现代科学内涵，以期寻找更有效的治疗药物和治疗方法。通过对文献的整理总结对AD疗效明显的单味药有人参、三七等，故在虚瘀致衰理论指导下配伍组成参七汤，其组成有补虚的人参6g，活血化瘀的三七6g，开窍醒神的冰片0.5g，共成补虚化瘀开窍醒神之方。
本实验结果显示，参七汤干预后可提高体内SOD活性，调动机体自卫，清除氧自由基堆积，降低MDA含量，有效地抑制了自由基过氧化损伤，阻断了未发AD。综上所述，参七汤能较好地改善AD模型大鼠的行为学异常，并能显著对抗自由基氧化损伤。
参考文献：
[1] Lesne S， Koh M T， Kotilinek L， et al. A specific amyloid-βprotein assembly in the brain impairs memory. Nature， 2006， 440（7082）：352.
[2] Lebel C P，Bondy S C.Oxidative damage and cerebral agin，Prog[J].Neurob，1992，38（4）：601-602.
[3] 崔旭，李文彬，张炳烈.D-半乳糖脑老化模型的脂质过氧化机理[J].中国老年医学杂志，1998，2（2）：382-391.
[4] 呼延和.开郁健脾法对脾虚大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影响的实验研究.沈阳：辽宁中医药大学硕士论文，2010：19.
[5] 孙琳琳.左归丸对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠抗氧化能力影响的实验研究.哈尔滨：黑龙江中医药大学硕士论文，2009.35.
[6]Terman A， Brunk UT.Oxidative stress，accumulation of.biological garbage，and aging.Antioxid Redox Signal，2006，8（1-2）：197-204.
关键词：阿尔茨海默病；中医药治疗；动物研究；
1 材料与方法
1.1实验动物 清洁级SD大鼠50只，雄性，体重200～250g，标准环境下饲养：温度23±0.5℃，自然光线，自由进食进水。（北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证编号为SCXK（京）2012-0001）；
1.2 试剂 Aβ1-42：美国Sigma公司， 1mg Aβ1-42溶于200μl人工脑脊液中，配成浓度为5mmol/L的溶液，0.22μm滤器过滤除菌，密封后置于37℃细胞培养箱中，96小时候即成凝聚态， 4℃保存备用。 D-Gal：上海生工生物，进口分装，溶于生理盐水中制成25%D-Gal溶液，过滤除菌，4℃保存。 SOD、MDA检测试剂盒购自上海哈灵生物科技有限公司。
1.3 仪器 Morris水迷宫系统：（北京硕林苑科技有限公司研制）； 大鼠脑立体定位仪（深圳瑞德生命科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 电动颅钻（北京硕林苑科技有限公司，STRONG-Ⅱ）； 微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）； 超速离心机。
1.4 动物筛选、动物分组及模型制备
1.4.1动物筛选及实验分组
大鼠喂养5天使其适应环境后进行水迷宫学习训练。参照文献 [1]训练方法，实验前先将大鼠放置在平台上15秒钟，然后将大鼠面向水迷宫池壁，头朝下，沿水迷宫四个象限中点依次放入水池，令其游完60秒，然后引导大鼠至平台休息15秒，平台设在第一象限。依次游完4个象限为训练1次。每天训练一次，训练3次后，继续测试1次，超过2个象限在60秒内不能找到平台者视为智力异常，予以剔除。余下大鼠供实验用。随机分为5组：正常组、假手术组、模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组，每组10只。各组大鼠分别于术前、术后7d及术后28d进行Morris水迷宫测试。
1.4.2模型制备
大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，头部备皮，使其皮肤暴露，碘伏消毒，在后囟处沿矢状线切开皮肤，暴露颅骨，固定在脑立体定位仪上，依照包新民的《大鼠脑立体定位图谱》，确定双侧海马注射点：前囟后3.0mm，左右旁开2.0，硬脑膜下3.6mm。用电动颅转打孔，用微量进样器缓慢注射Aβ1-42 2μL（Aβ1-42 5μg）5min内注射完毕，留针5min后缝合伤口。模型组注射Aβ1-42，假手术组注入等量生理盐水，单笼饲养至大鼠完全清醒。然后大鼠连续7d皮下注射青霉素（10万单位/d），防止感染；同时模型组、参七汤治疗组和脑复康治疗组大鼠连续30d腹腔注射D-Gal50mg（kgd）-1，使其衰老。
1.5 处理方法 D、E组从造模开始后就进行治疗，每天早晨8：00～9：00灌胃给药，参七汤治疗组和脑复康治疗组给予灌胃，其他组给予等体积的纯净水灌胃，每天1次，持续21d。
1.6 指标测定
3 讨论
本研究通过腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上，双侧海马内注射Aβ1-42来制作AD模型，能引起大鼠学习记忆能力下降，并使神经组织中出现老年斑（SP）及神经原纤维缠结（NFT），是现在较为理想的阿尔茨海默病动物模型的复制方法。用Morris水迷宫来观察大鼠的学习记忆功能，用ELISA测定大鼠血清SOD活性和MDA含量。
AD在病理上可表现为SP及NFT，神经元数量减少，神经细胞中脂褐素增多。进行性认知功能减退是AD的主要临床特征，也是AD治疗学研究的主要目标。D-Gal可引起AD大鼠脑过氧化损害， D-Gal在半乳糖氧化酶的作用下生成了乙醛糖和过氧化氢，使活性氧变多，脂质过氧化亢进，超氧阴离子自由基增多，增多的自由基损害生物膜系统，还会影响核酸和蛋白质的代谢，使得神经细胞的转录水平降低，使蛋白质的合成减少，从而引起神经细胞结构的改变和功能退化[2-3]。SP是AD的重要病理学改变之一，Aβ是SP的主要成分，Aβ可能在AD发病中起到核心作用，可能是通过激活蛋白激酶，产生兴奋毒性药物以及氧自由基和氧化应激反应等，从而直接或间接引起AD的发生。SP及NFT是由于Aβ沉积所引起，最终导致记忆力减退和学习障碍等行为学的改变。脑内急性注射Aβ可使动物产生与AD相似的行为障碍、记忆缺损等症状，并出现Aβ沉积[3]。
SOD能特异性清除超氧化物阴离子自由基，减少脂质过氧化反应，防止活性氧的生成和蓄积，使机体细胞与组织免受损害[4-5]，是生物机体重要的抗氧化酶。SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力。MDA是机体非酶系统产生的自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应的终产物之一[6]，脂质过氧化作用通过链式或链式支链反应来放大活性氧的作用，损伤细胞。MDA的含量高低可间接反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度。 AD发病率逐年增高，已成为继心血管疾病和肿瘤后第三大危及人类生命健康的疾病。近年来临床上对于AD的治疗，，有许多新的精神活性药物被用于恢复AD病人的认知能力或避免其进一步减退以及提高他们的社会生活功能， 这些药物均能缓解AD患者的记忆与认知功能，，延缓病情进展，但无法阻止AD的疾病发展进程。中医在治疗AD上有它独特的方法和优势，故本实验在虚瘀致衰理论指导下，运用配伍参七汤，旨在认识中医学理论虚瘀致衰的现代科学内涵，以期寻找更有效的治疗药物和治疗方法。通过对文献的整理总结对AD疗效明显的单味药有人参、三七等，故在虚瘀致衰理论指导下配伍组成参七汤，其组成有补虚的人参6g，活血化瘀的三七6g，开窍醒神的冰片0.5g，共成补虚化瘀开窍醒神之方。
本实验结果显示，参七汤干预后可提高体内SOD活性，调动机体自卫，清除氧自由基堆积，降低MDA含量，有效地抑制了自由基过氧化损伤，阻断了未发AD。综上所述，参七汤能较好地改善AD模型大鼠的行为学异常，并能显著对抗自由基氧化损伤。
参考文献：
[1] Lesne S， Koh M T， Kotilinek L， et al. A specific amyloid-βprotein assembly in the brain impairs memory. Nature， 2006， 440（7082）：352.
[2] Lebel C P，Bondy S C.Oxidative damage and cerebral agin，Prog[J].Neurob，1992，38（4）：601-602.
[3] 崔旭，李文彬，张炳烈.D-半乳糖脑老化模型的脂质过氧化机理[J].中国老年医学杂志，1998，2（2）：382-391.
[4] 呼延和.开郁健脾法对脾虚大鼠血清胃泌素、尿D-木糖影响的实验研究.沈阳：辽宁中医药大学硕士论文，2010：19.
[5] 孙琳琳.左归丸对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠抗氧化能力影响的实验研究.哈尔滨：黑龙江中医药大学硕士论文，2009.35.
[6]Terman A， Brunk UT.Oxidative stress，accumulation of.biological garbage，and aging.Antioxid Redox Signal，2006，8（1-2）：197-204.