【摘 要】
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目的: 研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体. 方法: 通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验, 选取鼠源抗血小板糖蛋白Iib/IIIa单克隆抗体(mAb P140).从分泌该mAb的杂交
【机 构】
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军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850北京军区总医院检验科,北京,100700;军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850;海军总医院中心实验科,北京,100037;
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目的: 研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体. 方法: 通过间接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验, 选取鼠源抗血小板糖蛋白Iib/IIIa单克隆抗体(mAb P140).从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中, 克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因, 构建原核表达重组质粒p3MH/P140к-Fd, 并在XLI-Blu菌株中进行表达.采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化, 用SDS-PAGE、 ELISA和Western blot等方法, 对P140 Fab抗体进行检测, 并通过血小板聚集抑制试验, 观察P140 Fab抗体的抗栓活性. 结果: SDS-PAGE和Western blot表明, 纯化的P140 Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47 000.ELISA的结果显示, P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合.在体外ADP诱导的血小板聚集试验中, P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性, IC50的平均值为16.85 mg/L.结论: 成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Iib/IIIa的Fab抗体.
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