论文部分内容阅读
目的利用酵母双杂交技术筛选促凋亡因子BIK的相互作用蛋白。方法利用PCR在成人肝cDNA文库中扩增BIK全长ORF，构建pDBLeu—BIK载体。转化MaV203，检测细胞毒性和自激活作用，确定His基础表达的3AT浓度，依次转化成人肝cDNA文库。在营养缺陷型培养基上挑去三阳性克隆，进行回转验证，以及利用GST—pull down、CO—IP在体内外进行验证。结果成功构建pDBLeu—BIK载体，转化酵母细胞MaV203，无细胞毒性、无自激活作用，3AT浓度为25mmol／L。经回转实验、GST—pul