【摘 要】
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对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究.通过盐析、DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTHFR,采用荧光法
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京,210009
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对亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)的体外酶促反应性质进行研究.通过盐析、DEAE-Sepharose fast flow柱层析纯化猪肝中的MTHFR,采用荧光法分析测定该酶纯化结果和酶促动力学性质.结果表明,MTHFR的纯化倍数可达20倍以上；测得最适酶促反应条件为pH6.8,37℃；NADPH浓度1.2 mmol/L;以5,10-亚甲基四氢叶酸为底物测得米氏常数km= 70.3 μmol/L.研究发现,别构抑制剂S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使MTHFR的体外活性降到原活性的60％以下.本文初步探讨了MTHFR的催化性质,对MTHFR催化活性的主要影响因素进行研究,为酶促法合成5-甲基四氢叶酸的进一步研究奠定了基础.
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