【摘 要】
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在本实验室已有的PRVJS-2012感染性克隆pBAC-JS2012及突变筛选菌株SW102-PRVBAC基础上,利用galk正筛选和卡那霉素的筛选标记基因,构建IE180两个拷贝启动子均删除的缺失克隆。
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2016YFD0500100),中国农业科学院科技创新工程专项(0201007001002),上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2016)第4-2号)。
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在本实验室已有的PRVJS-2012感染性克隆pBAC-JS2012及突变筛选菌株SW102-PRVBAC基础上,利用galk正筛选和卡那霉素的筛选标记基因,构建IE180两个拷贝启动子均删除的缺失克隆。利用同源重组将galk表达盒替换掉IE180TATA-box及左边297个碱基和右边172个碱基,经PCR鉴定和筛选获得阳性克隆SW102-galk。通过Westemblot分析,IE180仍然存在表达。在此基础上再利用相同的方法将Kna筛选标记基因替换掉另一个拷贝IE180TATA-box及其左边134
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