【摘 要】
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目的 了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制.方法 HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100 U/ml、400 U/ml、800 U/ml and1200 U/ml)刺激,10 h后
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目的 了解IFN-α对HuH7细胞固有免疫分子APOBEC3G表达的影响及其机制.方法 HuH7细胞给予不同浓度的IFN-α(0 U/ml、100 U/ml、400 U/ml、800 U/ml and1200 U/ml)刺激,10 h后提取细胞总RNA,RT-PCR和实时定量RT-PCR检测HuH7细胞内APOBEC3G的mRNA水平变化,Western blot分析APOBEC3G蛋白水平的表达;分别构建不同长度的含有IRF-E(IFN regulatory factor element)位点的APOBEC3G起始密码上游序列报告质粒、不含IRF-E和IRF-E位点突变的虫荧光素酶报告质粒,报告基因分析IFN-α刺激后APOBEC3G起始密码上游IRF-E位点对APOBEC3G表达的影响.结果 IFN-α上调HuH7细胞APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,并具有剂量依赖的效应.序列分析发现APOBEC3G起始密码上游的-298～-283和-57～-47位碱基分别存在IRF-E和ISRE(IFN stimulated response element)序列.报告基因分析结果显示,干扰素使含有IRF-E序列的APOBEC3G启动子报告质粒的虫荧光素酶的活性增加6～8倍,而不含IRF-E序列和IRF-E位点突变的报告质粒的虫荧光素酶活性在干扰素刺激后几乎没有变化.结论 IFN-α可通过IRF-E位点上调APOBEC3G mRNA和蛋白水平的表达,从而发挥抗病毒效应.
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