【摘 要】
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目的 探讨中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导气道黏液上皮细胞呼吸道黏蛋白(MUC)5AC产生和mRNA表达以及MUC5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1(specificity protein,
【机 构】
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重庆医科大学附属第二医院呼吸科,重庆,400010
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目的 探讨中性粒细胞弹力酶(neutrophil elastase,NE)诱导气道黏液上皮细胞呼吸道黏蛋白(MUC)5AC产生和mRNA表达以及MUC5AC基因顺式调控元件特殊蛋白-1(specificity protein,Sp-1)在该基因转录调控中的作用.方法 2006年3月至9月,在重庆医科大学病毒性肝炎研究所采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测培养细胞经0,10,50,100 nmol/L NE刺激诱导5,10,30 min后上清液MUC5AC质量浓度和细胞中MUC5AC mRNA表达水平.应用定点突变技术,在重组质粒的基础上建立MUC5AC启动子区Sp-1结合位点和核转录因子(NF)-kB结合位点单独突变体,并测定NE刺激的转染细胞荧光素酶相对活性.结果 (1)10,50,100 nmol/L NE处理A549细胞30 min,相同时间点不同浓度NE组MUC5AC蛋白表达水平分别与对照组比较差异均有显著性意义(t=3.406～20.909,均P＜0.05),且呈剂量依赖的趋势(P＜0.01).(2)100 nmol/L NE处理30 min后A549细胞MUC5AC mRNA相对表达量明显高于对照组(t=10.299,P＜0.01).(3)NE可诱导含有启动子序列-324 bp的重组质粒荧光素酶相对光强度(1.430±0.042)及pGL3E-MUC5ACNF-κB-MU荧光素酶相对光强度(1.570±0.071)增加,与未经NE诱导的未突变对照组相对光强度(0.799±0.051)相比差异具有显著性意义(t=25.675,t=11.110,P均＜0.01),而NE不能诱导pGL3E-MUC5AC-Sp-1-MU荧光素酶表达增加(P＞0.05).结论 NE可诱导A549细胞MUC5AC产生及其mRNA表达;MUC5AC基因启动子顺式作用元件下游Sp-1位点在NE诱导MUC5AC基因表达机制中起重要作用.
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