【摘 要】
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【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素（pIFN-δ5）的方法，并对其抗猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列（登录号：NM＿001164854.1）设计引物，以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增；将目的基因连接入经EcoRⅤ和HindⅢ双酶切的线性化pET-32a
【基金项目】
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国家重点研发计划（2021YFD1801104）； 江苏省杰出青年基金（BK20190003）； 江苏省自主创新基金（CX（21）3139）；
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【目的】试验旨在建立大量表达及纯化猪δ5干扰素（pIFN-δ5）的方法，并对其抗猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）感染的作用进行分析。【方法】根据GenBank中pIFN-δ5序列（登录号：NM＿001164854.1）设计引物，以猪肝脏组织cDNA为模板进行PCR扩增；将目的基因连接入经EcoRⅤ和HindⅢ双酶切的线性化pET-32a（+）载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，优化诱导表达条件，并进行SDS-PAGE和Western blotting检测；pIFN-δ5蛋白大量表达后使用镍离子亲和层析柱纯化，并测定蛋白纯度；采用细胞病变抑制法检测pIFN-δ5的干扰素效价，采用CCK8方法检测pIFN-δ5的细胞毒性，进一步测定其抗PEDV的感染能力。【结果】试验成功构建了重组表达质粒pET-pIFNδ5,经诱导条件摸索发现，在D600 nm值为0.5～0.6、IPTG浓度为0.8 mmol/L、37℃诱导条件下，目的蛋白pIFN-δ5主要表达于菌体裂解上清中；经大量表达并纯化后可获得纯度＞95%的pIFN-δ5蛋白。使用VSV/MDCK细胞滴定系统检测pIFN-δ5的比活性为5×10~4U/mg; CCK8检测表明pIFN-δ5的细胞毒性较小。实时荧光定量PCR、Western blotting和间接免疫荧光检测结果表明，pIFN-δ5具有显著抗PEDV感染能力。【结论】本试验建立了表达和纯化pIFN-δ5的方法，通过一系列的体外抗病毒试验证实pIFN-δ5具有良好的抗PEDV感染的活性，为将pIFN-δ5作为抗病毒药物及临床应用奠定了基础。
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