【摘 要】
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目的 探讨SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法 快速检测常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的可行性. 方法 选取经测序验证携带有tern、shy、ctx-m-1组
【机 构】
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深圳市光明新区公明人民医院检验科,广东,深圳,518000;深圳市福田区人民医院检验科,广东深圳,518000
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目的 探讨SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法 快速检测常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的可行性. 方法 选取经测序验证携带有tern、shy、ctx-m-1组、ctx-m-9组耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯茵作为阳性菌株,建立细菌耐药基因SYBR Green I实时荧光定量多重PCR检测体系,这四种耐药基因的扩增产物片段长度和融解温度(Tm值)都不同,可通过结合融解曲线分析加以区别.用此体系检测110株大肠埃希茵和94株肺炎克雷伯菌.根据特异性Tm值的有无和差别判断是否携带有耐药基因及携带耐药基因型别,结果 与耐药表型、琼脂糖电泳、测序结果 对照.结果 经SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析,分别有47株(42.7%)大肠埃希菌和34株(36.2%)肺炎克雷伯菌携带有这四种常见的ESBLs耐药基因,与表型确证实验和电泳结果 比较达到100%的一致性;根据Tm值的不同,对耐药基因进行鉴别,携带单个耐药基因菌株的检测与电泳结果 和测序结果 比较达到100%的一致性;对携带多个耐药基因菌株的检测不能达到较好的分辨性. 结论 SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法 可以快速筛查常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,对携带单个耐药基因的细茵的基因型能进行准确鉴定.这对指导临床医生合理使用抗生素进行临床治疗和对耐药细茵的流行病学监测具有重要价值.
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