【摘 要】
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目的制备细粒棘球绦虫PI3KP110亚基酪氨酸激酶区(EgPI3KP110RTK)蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgPI3KP110蛋白的功能提供检测抗体。方法将EgPI3KP110RTK(1-352aa)基因序列克
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院医学检验中心,新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院
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目的制备细粒棘球绦虫PI3KP110亚基酪氨酸激酶区(EgPI3KP110RTK)蛋白的多克隆抗体,为进一步研究EgPI3KP110蛋白的功能提供检测抗体。方法将EgPI3KP110RTK(1-352aa)基因序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli ROSETTA(DE3)株,IPTG诱导蛋白表达,以GST亲和层析纯化EgPI3K P110RTK蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,采用ELISA法测定抗体效价,Western blotting检测所制备抗体与EgPI3KP110RTK蛋白的反应性。结果经0.8mmol/L IPTG诱导,表达出约66ku的EgPI3KP110RTK重组蛋白,制备获得效价在5.12×10~5以上的多克隆抗体,该抗体能够与EgPI3KP110RTK重组蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗EgPI3KP110亚基多克隆抗体,为研究EgPI3K激酶在Eg中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。
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