【摘 要】
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为了在小鼠胚胎干细胞（ES）中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电穿孔法将线性
【机 构】
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第二军医大学医学遗传学教研室,香港科技大学生物化学系
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为了在小鼠胚胎干细胞（ES）中引起神经细胞cdc2类激酶调节亚基p35Nck5a基因的定点重复，采用常规的分子克隆技术，构建得到长约12.2kb的基因重复性打靶载体pGDTV。用电穿孔法将线性化的pGDTV载体转入ES细胞，经过G418和GANC分组药物选择，获得245个双药物抗性的细胞克隆，细胞存活率为6.22×10－5。经PCR和基因组Southern杂交鉴定，2个ES细胞克隆发生了p35Nck5a基因的重复，同源重组率为5.08×10－7。负向选择系统的应用使同源重组事件的富集效率提高了7倍。为建立Alzheimer病的转基因小鼠模型打下了基础。
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