观察蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化模型中的表达及其对核心结合因子α1(Cbfα1)表达的调节。
方法体外培养的大鼠VSMC，分为正常磷组(1.3 mmol/L)和高磷组(2.6 mmol/L)，培养7 d后，观察细胞形态及茜素红染色细胞钙盐沉积，实时定量PCR检测Cbfα1、骨桥蛋白(OPN)mRNA水平，Western印迹检测磷酸化Akt(p－Akt)(ser473)、磷酸化mTOR (p－mTOR )(S2448)、Cbfα1和OPN蛋白的表达。检测到Akt、mTOR活化表达后，给予不同浓度的渥曼青霉素(5、10、30、50和100 nmol/L)和雷帕霉素(1、10和100 ng/ml)干预24、48 h后，检测Cbfα1、OPN、p－Akt和p－mTOR基因和蛋白表达，7 d后观察VSMC钙盐沉积变化。
结果VSMC高磷干预7 d后，与正常磷组相比，高磷组钙盐沉积明显，Cbfα1、OPN mRNA表达增高(均P<0.05)，p－Akt、p－mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达增高(均P<0.05)。渥曼青霉素、雷帕霉素干预24 h后，相对于高磷组，高磷＋渥曼青霉素30、50、100 nmol/L组Cbfα1、OPN mRNA表达明显下调(均P<0.05)；高磷＋雷帕霉素1、10和100 ng/ml组Cbfα1、OPN mRNA表达下调(均P<0.05)。渥曼青霉素、雷帕霉素干预48 h后，与高磷组比较，高磷＋渥曼青霉素30、50、100 nmol/L)组p－Akt、Cbfα1和OPN蛋白表达明显下调(均P<0.05)；高磷＋雷帕霉素1、10、100 ng/ml组，p－mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达呈剂量依赖性下调(均P<0.05)。VSMC培养7 d后，与高磷组相比，高磷＋渥曼青霉素和高磷＋雷帕霉素组钙盐沉积明显减轻。
结论高磷可体外诱导大鼠VSMC钙化，Akt、mTOR参与了高磷诱导的大鼠VSMC钙化，并可能通过调控Cbfα1因子而起作用。