3D打印支架载神经分化因子1修饰的神经干细胞修复脊髓损伤

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目的

探讨3D打印仿生支架载神经分化因子1(NeuroD1)修饰的神经干细胞(NSCs)修复大鼠脊髓损伤的作用。

方法

制备3D仿生脊髓支架,将携带NeuroD1基因的反转录病毒转染NSCs,构建NeuroD1过表达NSCs。选择成年雌性SD大鼠40只,按随机数字表法分为对照组(A组)、支架组(B组)、支架+NSCs-绿色荧光蛋白(GFP)组(C组)和支架+NSCs-NeuroD1组(D组),每组10只。建立大鼠脊髓损伤模型,1周后给予实验干预。对照组为显微镜下切除损伤处3 mm脊髓。利用RT-PCR鉴定NeuroD1过表达NSCs的构建。荧光显微镜下观察移植NSCs存活情况。神经核(Neun)和生长相关蛋白-43(GAP-43)免疫荧光染色鉴定移植NSCs分化和髓鞘形成情况。于实验干预后1,2,4,6,8周进行BBB评分评价各组大鼠运动功能;8周观察运动和感觉诱发电位,判断各组大鼠神经电生理变化情况。

结果

RT-PCR结果证实成功构建过表达NeuroD1 NSCs。D组各时相点BBB评分最高,与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。神经电生理结果表明,D组运动和感觉潜伏期最短,与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.05);D组运动和感觉振幅最大,与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色结果表明,8周时D组仍可见GFP阳性细胞,部分分化为神经元。GAP-43染色阳性,部分髓鞘形成。

结论

3D打印支架载NeuroD1修饰的NSCs能促进脊髓损伤大鼠神经环路的重建,对运动和感觉功能恢复有促进作用。

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