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摘要：利用选择性培养基检测桑椹酵素中乳酸菌的含量。本检测方法进行了样品制备、加入乳酸菌回收等方面实验。取得的加入乳酸菌回收率在98%～105%之间。总结出利用本方法检测桑椹酵素中乳酸菌总数，其检测方法简单、安全、经济实用。可用于各种桑椹酵素中乳酸菌的检测。
关键词：桑椹酵素；乳酸菌
乳酸菌是一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。所以本文选用选择性培养基检测桑椹酵素中乳酸菌的含量，检测过程相对简单、安全、经济实用，经过多次试验，取到了较好的试验效果。
1、试验方面
1.1试验原理
桑椹酵素经过弱碱中和成中性后，利用选择性MC培养基检测桑椹酵素中嗜热链球菌计数，同时利用选择性MRS琼脂培养基检测乳杆菌的总数，两者总和为桑椹酵素的乳酸菌总数。
1.2使用的培养基和试剂
生理盐水
MRS培养基及莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐
改良MRS培养基
MC培养基
革兰氏染色液
莫匹罗星锂盐：化学纯。
半胱氨酸盐酸盐：纯度>99%
1.3使用的设备和材料
微生物实验室常规灭菌及培养设备
恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
冰箱：2 ℃～5 ℃。
均质器及无菌均质袋
天平：感量0.01g。
均质杯或灭菌乳钵。
无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
1.4操作步骤
1.4.1酵素样品制备
酵素样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
酵素冷冻样品可先使其在2 ℃～5 ℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45 ℃的條件解冻，时间不超过15 min。
固体酵素：以无菌操作称取25g样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1∶10样品匀液；或置于225mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min制成1∶10的样品匀液。
液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1∶10的样品匀液。
1.4.2步骤
用1mL无菌吸管吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁注入装有9ml生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管使其均匀，制成1：100的样品匀液。
另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管。
嗜热链球菌计数：根据酵素中嗜热链球菌活菌数的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的MC培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使其混合均匀。36℃±1℃需氧培养72h±2h，培养后计数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳杆菌计数：根据酵素中乳杆菌活菌数的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的MRS琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使其混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h，培养后计数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳酸菌计数（嗜热链球菌和乳杆菌检测计数之和）。
2.结果与讨论
取桑椹酵素样品加入定量的乳酸菌活菌，按照以上检测方法进行测定，其结果如表1。
3、结论
利用选择性培养基检测桑椹酵素中乳酸菌的含量，该方法样品前处理相对简单、经济实用。其乳酸菌回收率令人满意，是一种检测桑椹酵素中乳酸菌含量的简单实用的方法。
参考文献：
[1]徐进 刘秀梅 杨宝兰 李志刚.食品卫生微生物检验标准汇编[S].北京：中国标准出版社，2009：329-337。
关键词：桑椹酵素；乳酸菌
乳酸菌是一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。所以本文选用选择性培养基检测桑椹酵素中乳酸菌的含量，检测过程相对简单、安全、经济实用，经过多次试验，取到了较好的试验效果。
1、试验方面
1.1试验原理
桑椹酵素经过弱碱中和成中性后，利用选择性MC培养基检测桑椹酵素中嗜热链球菌计数，同时利用选择性MRS琼脂培养基检测乳杆菌的总数，两者总和为桑椹酵素的乳酸菌总数。
1.2使用的培养基和试剂
生理盐水
MRS培养基及莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐
改良MRS培养基
MC培养基
革兰氏染色液
莫匹罗星锂盐：化学纯。
半胱氨酸盐酸盐：纯度>99%
1.3使用的设备和材料
微生物实验室常规灭菌及培养设备
恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
冰箱：2 ℃～5 ℃。
均质器及无菌均质袋
天平：感量0.01g。
均质杯或灭菌乳钵。
无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。
无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
无菌锥形瓶：500 mL、250 mL。
1.4操作步骤
1.4.1酵素样品制备
酵素样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
酵素冷冻样品可先使其在2 ℃～5 ℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45 ℃的條件解冻，时间不超过15 min。
固体酵素：以无菌操作称取25g样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1∶10样品匀液；或置于225mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min制成1∶10的样品匀液。
液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1∶10的样品匀液。
1.4.2步骤
用1mL无菌吸管吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁注入装有9ml生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管使其均匀，制成1：100的样品匀液。
另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管。
嗜热链球菌计数：根据酵素中嗜热链球菌活菌数的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的MC培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使其混合均匀。36℃±1℃需氧培养72h±2h，培养后计数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳杆菌计数：根据酵素中乳杆菌活菌数的估计，选择2～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的MRS琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使其混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h，培养后计数。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。
乳酸菌计数（嗜热链球菌和乳杆菌检测计数之和）。
2.结果与讨论
取桑椹酵素样品加入定量的乳酸菌活菌，按照以上检测方法进行测定，其结果如表1。
3、结论
利用选择性培养基检测桑椹酵素中乳酸菌的含量，该方法样品前处理相对简单、经济实用。其乳酸菌回收率令人满意，是一种检测桑椹酵素中乳酸菌含量的简单实用的方法。
参考文献：
[1]徐进 刘秀梅 杨宝兰 李志刚.食品卫生微生物检验标准汇编[S].北京：中国标准出版社，2009：329-337。