强直性脊柱炎相关抗原HLA-B2704基因克隆

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目的对HLA-B2704的编码基因进行克隆。方法通过酚提法获取基因组DNA,用EcoRⅠ酶切,6g/L琼脂糖凝胶分离目的基因片段,采用同位素末端标记的寡核苷酸探针对重组体噬斑进行转膜原位杂交,筛选阳性克隆,并进一步克隆化,用WizardλDNA纯化系统试剂盒提取纯化λDNA。结果经酚提法获取基因组DNA浓度为0.8g/L,D260/D280为1.75,经高盐洗脱和乙醇纯化法获取的DNA浓度为0.16g/L,D260/D280为1.80,构建的λgt10重组体,体外包装后转染C600hflA大肠杆菌,形成无色透明的重组噬菌体噬斑。对所建文库用同位素末端标记的寡核苷酸探针对重组体噬斑进行转膜原位杂交,筛选出3个阳性克隆。重复克隆化,用阳性噬菌体噬斑转染C600hflA大肠杆菌,产生溶菌物。结论建立了B2704基因组文库,并克隆了B2704DNA。
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