目的对自行配制组方的Ⅰ号冻存液冻存小鼠肝细胞进行研究,探索一种效果较好的冻存液以改善冻存肝细胞质量。方法以体重20～30g的昆明小鼠为肝细胞供体,用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞。将分离好的肝细胞分别以Ⅰ号冻存液(实验组)和标准冻存液(对照组)进行逐级降温缓慢冻存,置液氮中。于0.5、1、1.5、2个月快速复苏肝细胞,观察并测定细胞活率、功能和形态学。结果冻存小鼠肝细胞2个月后复苏检测,实验组的肝细胞活率台盼蓝(TB)染色为(80.18±2.44)%,对照组肝细胞活率TB染色为(49.71±3.51)%,两组差异有显著性(t=23.64,P<0.05);血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的值,实验组分别为(14.03±2.21)U/L、(15.14±3.03)U/L、(15.11±2.10)U/L,而对照组分别为(24.28±1.96)U/L、(25.44±2.06)U/L、(26.22±3.23)U/L,两两比较,差异均有显著性(t分别为8.84、8.58、8.32,均P<0.05);合成清蛋白的值,实验组为(3.24±0.18)g/L,对照组为(2.56±0.33)g/L,两组差异有显著性(t=9.25,P<0.05)。同一组各个复苏时段,实验组与对照组的肝细胞活率,肝细胞ALT、AST、LDH的漏出率,合成清蛋白的能力之间无差别(均P>0.05)。结论在本研究中,冻存小鼠肝细胞2个月,Ⅰ号冻存液较常规冻存液能有效减轻小鼠肝细胞的损伤,发挥良好保护作用。小鼠肝细胞在Ⅰ号冻存液的保护下,置液氮中保存2个月,不影响肝细胞活性。