【摘 要】
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目的构建miR-21慢病毒干扰载体,并观察其对胆管癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法针对目标序列,设计2条合适的PCR引物进行退火得到插入片段序列。将慢病毒干扰载体双酶切,纯
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院微创外科,
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目的构建miR-21慢病毒干扰载体,并观察其对胆管癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法针对目标序列,设计2条合适的PCR引物进行退火得到插入片段序列。将慢病毒干扰载体双酶切,纯化后与退火产物进行定向连接,产生慢病毒干扰质粒和阴性对照质粒,将其与慢病毒包装质粒混合物共转染293T,包装产生慢病毒。使用收获的慢病毒感染胆管癌细胞HUCCT1,荧光显微镜观察感染效率,细胞增殖和划痕实验分别检测HUCCT1下调miR-21后细胞增殖能力和迁移能力的改变。结果成功构建了miR-21慢病毒干扰载体。感染胆管癌细胞HUCCT1后,miR-21表达降低;下调miR-21(LV-anti-miR21)组和感染空白慢病毒载体(LV-GFP)组相比,LV-anti-miR21组增殖能力和迁移能力均明显下降(P<0.05)。结论成功构建miR-21慢病毒干扰载体;下调miR-21能够抑制胆管癌细胞的增殖,降低胆管癌细胞的迁移能力。
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