【摘 要】
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目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),研究内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌起搏电流(If)及其基因表达的影响.方法:分离1-3 d新生大鼠的心
【机 构】
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苏州大学附属第一医院心内科,江苏,苏州,215006苏州大学血液病研究室,江苏,苏州,215006;
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目的:运用膜片钳全细胞技术和实时定量聚合酶链式反应(PCR),研究内皮素-1(ET-1)及其受体拮抗剂对新生大鼠心室肌起搏电流(If)及其基因表达的影响.方法:分离1-3 d新生大鼠的心室肌细胞;测定超极化激活的环核苷酸门控通道(HCN)亚型1、HCN2、HCN3和HCN4的表达情况;记录If并研究其特性.其次分别用不同浓度(0、1、10、100 nmol/L)ET-1刺激细胞3 h,用100 nmol/L ET-1刺激细胞不同时间(0、0.5、1、3、6 h),用100 nmol/L ET-1加1 000 nmol/L ETA拮抗剂(BE-18257B)或ETB拮抗剂(IRL-1038)刺激心肌细胞3 h,观察ET-1对If和HCN的影响.结果:HCN1、HCN2、HCN3 和 HCN4在总HCN的表达中所占比例分别为(0.23±0.01)%、(83.58±0.04)%、(0.79±0.01)%、(15.44±0.01)%.全细胞膜片钳记录到超极化激活、4 mmol/L CsCI可阻断If;10、100 nmol/L ET-1刺激3 h后,HCN2分别增加0.1、2倍,HCN4增加0.1、0.5倍;相同浓度ET-1刺激不同时间后,HCN2增加0.3、1、5、5.1倍,HCN4增加0.1、0.6、2、2.1倍,而ET-1对HCN1和HCN3无显著影响;加BE-18257B后HCN2和HCN4表达明显降低,If减小;而IRL-1038对HCN表达和If无显著影响.结论:(1)新生大鼠心室肌HCN的表达以HCN2和HCN4为主,并有超极化激活的If;(2)ET-1使其HCN2和HCN4表达增加,If增大,其作用主要通过ETA受体实现.
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