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目的
探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。
方法实验分为A375-RhoD组和A375-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）组，分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞仪检测细胞周期，Western印迹法检测丝切蛋白、磷酸化丝切蛋白、Diaph2和RhoD的表达。
结果与A375-EGFP组细胞相比，A375-RhoD组细胞体积增大，应力纤维变细，软弱无力，黏着斑增多；丝状伪足形成增加；皱褶缘和板状伪足无明显变化。Transwell迁移实验显示，A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为152.67 ± 11.23和72.67 ± 5.03，两组间差异有统计学意义（t= 11.25，P < 0.05）。Transwell人工基底膜侵袭试验显示，A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为78.33 ± 12.34和9.00 ± 1，两组间差异有统计学意义（t = 9.70，P < 0.05）。A375-EGFP和A375-RhoD两组间G1期、S期和G2期细胞所占百分比差异均无统计学意义（P > 0.05）。Western印迹结果显示，A375-RhoD组细胞可在RhoD的刺激下激活下游信号效应分子Diaph2，促进其表达，而A375-EGFP组未能激活，两组间丝切蛋白和磷酸化丝切蛋白表达差异不显著。
结论RhoD过表达可能通过下游效应分子Diaph2调节细胞骨架进而抑制A375细胞的迁移和侵袭能力。