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doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2013.19.68
现有的研究表明,表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路在肺癌的发生和发展中起重要作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIS)是目前针对EGFR治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的重要分子靶向药物。EGFR的不同存在状态与TKIS的疗效相关。EGFR在非小细胞肺癌中高表达,免疫组化法是一种有效的检测NSCLC标本中蛋白质水平的方法[1],但多数集中在NSCLC手术切除标本的研究上[2],对于纤维支气管镜(简称纤支镜)活检小标本的研究较少。在此我们应用免疫组化技术对纤支镜NSCLC活检标本的EGFR基因进行检测,探讨EGFR在非小细胞肺癌患者中的表达、检测及临床意义。
资料与方法
一般资料:2009年10月~2012年10月160例经病理诊断为NSCLC的活检标本,其中男101例,女59例,年龄31~83岁,中位数62岁;有吸烟史112例;组织学类型:腺癌104例,鳞癌44例,腺鳞癌5例,大细胞癌7例。所检患者均为初次诊断。另外收集10例正常肺组织活检标本和10例癌前病变肺组织活检标本进行对照。
试剂方法:石蜡包埋组织HE染色。免疫组织化学采用EnVisim二步法,抗体EGFR。CK5/6(标记鳞癌),CK8(标记腺癌),所有一抗均为单克隆抗体,均为工作液。参照试剂盒说明操作,关键步骤如下:切片常规脱蜡至水,高压修复抗原,3%H2O2孵育10分钟,滴加一抗4℃过液,滴加二抗37℃孵育20分钟。DAB染色,苏木精对比染色,透明封固,以PBC代替做空白对照。结果判定:EGFR表达主要定位于胞浆/胞核是棕黄色或棕褐色颗粒状。
采用参考文献的方法进行打分[1],0分无色,1分浅着色,2分深着色,3分棕褐色;按400视野下阴性细胞所占百分比打分:0阴性,1分阳性细胞≤25%,2分26%~50%,3分51%~75%,4分≥75%。染色结果分1级标准为着色强度乘以阳性细胞比例,0分阴性(-),1~3分弱阳性(+),4~6分中度阳性(++),8~12分强阳性(+++)。
统计学处理:应用SPSS16.0统计软件进行分析。采用χ2检验分析免疫组织化学结果;以P<0.05为具有显著统计学差异,P>0.05差异无统计学意义。
结 果
160例NSCLC患者中,EGFR阳性66例(41.2%)。其中男45例(44.6%),女21例(35.6%);腺癌55例(52.8%),鳞癌6例(13.6%)。腺鳞癌2例(40%),大细胞肺癌3例(42.8%)。经统计学分析,腺癌鳞癌两者差异有统计学意义(P<0.05),大细胞癌、腺鳞癌与腺癌相比无统计学意义(P>0.05)。
160例中有120例获得手术切除标本,将纤支镜活检标本和手术切除标本EGFR基因检测结果对比,活检标本阳性率低于手术标本,但差异无统计学意义(P>0.05)。
10例正常肺组织中只有1例EGFR表达弱阳性。10例癌前病变肺组织中2例EGFR弱阳性表达。由此可见肺癌组织中EGFR的表达明显高于正常肺组织,而且EGFR在正常肺组织、癌前病变和肺癌组织中的表达是逐级升高的[3]。
讨 论
结果显示,EGFR基因检测肺NSCLC,腺癌阳性率高于鳞癌,与大细胞肺癌差异无统计学意义;腺癌中男性与女性患者EGFR基因阳性率差异无统计学意义;EGFR阳性率与患者性别年龄无关,同相关资料一致[4,5]。160例中有135例获得手术切除标本,将其EGFR基因检测结果与纤支镜活检结果相比较,阳性率稍高但差异无统计学意义。由此可见EGFR基因检测可行性好,对临床进一步行手术切除、放化疗或者靶向治疗提供很好的参考价值。
近年来肺癌的发病率和死亡率迅速上升,跃居肿瘤第1位。虽然治疗技术有了很大提高,但5年生存率没有明显改善[6]。因此预防并控制远处转移是肺癌治疗中亟待解决的问题。我们应用纤支镜技术检测EGFR基因不仅可行,而且实现了早发现、早诊断、早治疗;方法安全、直观是中小医院可普及的一项检测方法;并且具有创伤小、痛苦少、费用低等人性化优势,具有重要现实意义。
参考文献
1 李榕,韩宝惠,等.EGFR检测在肺癌中的临床意义[J].临床肿瘤学杂志,2004,9(4):420-425.
2 梁智勇,曾暄,张静,等.非小细胞肺癌290例表皮生长因子受体基因突变和拷贝数的检测分析[J].中华病理学杂志,2008,37(10):654-659.
3 Eberhand DA,Giaccone G,Johnson BE,et al.Biomarkers of response to epidermal growth factor receptor inhibitors in Non-Small-Cell Lung Cancer Working Group:standardardization for use in the clinical trial setting.J Clin Oncol,2008,26(6):983-994.
4 林云恩,何莎,等.纤维支气管镜非小细胞肺癌活检标本的表皮生长因子受体基因检测[J].中华病理学杂志,2011,40(2):529-5807.
5 曾暄,武莎斐,等.非小细胞肺癌EGFR和HERI基因状态及相关性[J].中华病理学杂志,2006,35(7):398-402.
6 Parkin DM,Bray FI,Devesa SS.Cancer burden in the year 2000.The global picture[J].Eur J Canceren,2001,37(8):4-66.
现有的研究表明,表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路在肺癌的发生和发展中起重要作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIS)是目前针对EGFR治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的重要分子靶向药物。EGFR的不同存在状态与TKIS的疗效相关。EGFR在非小细胞肺癌中高表达,免疫组化法是一种有效的检测NSCLC标本中蛋白质水平的方法[1],但多数集中在NSCLC手术切除标本的研究上[2],对于纤维支气管镜(简称纤支镜)活检小标本的研究较少。在此我们应用免疫组化技术对纤支镜NSCLC活检标本的EGFR基因进行检测,探讨EGFR在非小细胞肺癌患者中的表达、检测及临床意义。
资料与方法
一般资料:2009年10月~2012年10月160例经病理诊断为NSCLC的活检标本,其中男101例,女59例,年龄31~83岁,中位数62岁;有吸烟史112例;组织学类型:腺癌104例,鳞癌44例,腺鳞癌5例,大细胞癌7例。所检患者均为初次诊断。另外收集10例正常肺组织活检标本和10例癌前病变肺组织活检标本进行对照。
试剂方法:石蜡包埋组织HE染色。免疫组织化学采用EnVisim二步法,抗体EGFR。CK5/6(标记鳞癌),CK8(标记腺癌),所有一抗均为单克隆抗体,均为工作液。参照试剂盒说明操作,关键步骤如下:切片常规脱蜡至水,高压修复抗原,3%H2O2孵育10分钟,滴加一抗4℃过液,滴加二抗37℃孵育20分钟。DAB染色,苏木精对比染色,透明封固,以PBC代替做空白对照。结果判定:EGFR表达主要定位于胞浆/胞核是棕黄色或棕褐色颗粒状。
采用参考文献的方法进行打分[1],0分无色,1分浅着色,2分深着色,3分棕褐色;按400视野下阴性细胞所占百分比打分:0阴性,1分阳性细胞≤25%,2分26%~50%,3分51%~75%,4分≥75%。染色结果分1级标准为着色强度乘以阳性细胞比例,0分阴性(-),1~3分弱阳性(+),4~6分中度阳性(++),8~12分强阳性(+++)。
统计学处理:应用SPSS16.0统计软件进行分析。采用χ2检验分析免疫组织化学结果;以P<0.05为具有显著统计学差异,P>0.05差异无统计学意义。
结 果
160例NSCLC患者中,EGFR阳性66例(41.2%)。其中男45例(44.6%),女21例(35.6%);腺癌55例(52.8%),鳞癌6例(13.6%)。腺鳞癌2例(40%),大细胞肺癌3例(42.8%)。经统计学分析,腺癌鳞癌两者差异有统计学意义(P<0.05),大细胞癌、腺鳞癌与腺癌相比无统计学意义(P>0.05)。
160例中有120例获得手术切除标本,将纤支镜活检标本和手术切除标本EGFR基因检测结果对比,活检标本阳性率低于手术标本,但差异无统计学意义(P>0.05)。
10例正常肺组织中只有1例EGFR表达弱阳性。10例癌前病变肺组织中2例EGFR弱阳性表达。由此可见肺癌组织中EGFR的表达明显高于正常肺组织,而且EGFR在正常肺组织、癌前病变和肺癌组织中的表达是逐级升高的[3]。
讨 论
结果显示,EGFR基因检测肺NSCLC,腺癌阳性率高于鳞癌,与大细胞肺癌差异无统计学意义;腺癌中男性与女性患者EGFR基因阳性率差异无统计学意义;EGFR阳性率与患者性别年龄无关,同相关资料一致[4,5]。160例中有135例获得手术切除标本,将其EGFR基因检测结果与纤支镜活检结果相比较,阳性率稍高但差异无统计学意义。由此可见EGFR基因检测可行性好,对临床进一步行手术切除、放化疗或者靶向治疗提供很好的参考价值。
近年来肺癌的发病率和死亡率迅速上升,跃居肿瘤第1位。虽然治疗技术有了很大提高,但5年生存率没有明显改善[6]。因此预防并控制远处转移是肺癌治疗中亟待解决的问题。我们应用纤支镜技术检测EGFR基因不仅可行,而且实现了早发现、早诊断、早治疗;方法安全、直观是中小医院可普及的一项检测方法;并且具有创伤小、痛苦少、费用低等人性化优势,具有重要现实意义。
参考文献
1 李榕,韩宝惠,等.EGFR检测在肺癌中的临床意义[J].临床肿瘤学杂志,2004,9(4):420-425.
2 梁智勇,曾暄,张静,等.非小细胞肺癌290例表皮生长因子受体基因突变和拷贝数的检测分析[J].中华病理学杂志,2008,37(10):654-659.
3 Eberhand DA,Giaccone G,Johnson BE,et al.Biomarkers of response to epidermal growth factor receptor inhibitors in Non-Small-Cell Lung Cancer Working Group:standardardization for use in the clinical trial setting.J Clin Oncol,2008,26(6):983-994.
4 林云恩,何莎,等.纤维支气管镜非小细胞肺癌活检标本的表皮生长因子受体基因检测[J].中华病理学杂志,2011,40(2):529-5807.
5 曾暄,武莎斐,等.非小细胞肺癌EGFR和HERI基因状态及相关性[J].中华病理学杂志,2006,35(7):398-402.
6 Parkin DM,Bray FI,Devesa SS.Cancer burden in the year 2000.The global picture[J].Eur J Canceren,2001,37(8):4-66.