【摘 要】
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本文主要探讨了不同精子处理对应用显微授精介导(intracytoplasmic sperm injection-mediated trans-genesis,ICSI-Tr)生产转基因水牛胚胎效率的影响。本试验以p18T-BCN5.2-I
【机 构】
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广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室
【基金项目】
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国家转基因重大专项(2008ZX08007-003);国家自然基金(30960251);广西自然基金(0991007Z);南宁市科技攻关(201003070G)
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本文主要探讨了不同精子处理对应用显微授精介导(intracytoplasmic sperm injection-mediated trans-genesis,ICSI-Tr)生产转基因水牛胚胎效率的影响。本试验以p18T-BCN5.2-IFN-1.1pA-EGFP为载体,比较了精子的不同处理方式(NaOH和冻融)、NaOH处理精子不同时间(5min,10min,20min,30min和60min)以及不同外源DNA浓度(5ng/μL,10ng/μL,25ng/μL和50ng/μL)对ICSI-Tr转基因效率的影响。结果显示:NaOH处理组的囊胚EGFP表达率(46.1%),与冻融精子处理组(47.1%)差异不显著,但发育率显著高于冻融处理精子组(28.3%vs16.7%,P<0.05)。处理60min组和30min组的分裂率分别为78.9%和77.5%,显著高于20min、10min和5min组的64.0%、60.0%和64.0%(P<0.05),其中30min处理组的囊胚EGFP表达率高达44.4%,显著高于其它处理组(P<0.05)。25ng/μL组和50ng/μL组的早期胚胎EGFP表达效率差异不显著(41.3%vs42.5%),但显著高于5ng/μL组和10ng/μL组(22.5%和35.5%),25ng/μL组的囊胚EGFP表达效率显著高于其它组(P<0.05)。本研究优化了应用ICSI-Tr生产转基因水牛胚胎技术体系,为获得ICSI-Tr转基因水牛奠定了良好的工作基础。
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