【摘 要】
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目的：用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶（TH）基因的重组质粒,并用实时定量PCR（RQPCR）方法制备标准品。方法：提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-
【机 构】
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南通大学医学院诊断学教研室,南通大学医学院生理学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（30870929）, 南通市应用研究计划（K2008006 K2008019）
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目的：用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶（TH）基因的重组质粒,并用实时定量PCR（RQPCR）方法制备标准品。方法：提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品。结果：肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线。结论：该
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