目的 研究从胎儿附属物中分离培养及冻存细胞的较佳方法,以期为组织工程、细胞治疗和基因治疗提供种子细胞.方法 取足月产胎儿脐带和胎盘,用酶消化法获得细胞,用相应培养液进行培养传代.将胎盘、脐带组织块冻存,检测加入不同浓度抗冻剂二甲亚砜的组织复苏后的活细胞率,透射电镜下观察其超微结构,并与新鲜组织进行比较;冻存培养所得人脐带血管周细胞和胎膜贴壁细胞的原代细胞,用免疫化学法检测冻存前后各自免疫表型的表达.结果 新鲜脐带组织活细胞率为67.0%,抗冻剂体积分数为5%、10%、15%、20%时,冻存复苏脐带组织的活细胞率分别为23.4%、55.5%、48.8%、31.8%.抗冻剂体积分数为10%时,冻存复苏组织与新鲜组织活细胞率最接近(P＞0.05),体积分数为5%和20%时与新鲜组织该指标比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);透射电镜观察结果与之吻合.胎盘组织与脐带组织的情况类同.细胞冻存后免疫表型无明显变化.结论 本方法可以从胎儿附属物中分离培养出大量种子细胞,冻存复苏后细胞免疫表型未发生改变,抗冻剂体积分数为10%时效果最好.