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【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定雷替曲塞含量的方法。方法采用KromasilC18柱，流动相为甲醇：0.15molL乙酸水溶液（42：58，流速为0.9mLmin，检测波长为348nm。雷替曲塞的线性范围为0.0125-0.0638mgmL（r=0.9993。雷替曲塞平均回收率为99.12%（RS=0.56%。结论该方法简便、准确、专属，可用于注射用雷替曲塞的含量测定。
【关键词】雷替曲塞；HPLC；含量测定
雷替曲塞是一种用于治疗晚期结直肠癌和恶性胸膜间皮瘤的抗肿瘤药物。本品为高选择性抗代谢药物，是新一代水溶性胸苷酸合酶抑制剂，在体内被主动摄入细胞内，而后代谢为一系列多聚谷氨酸类化合物，这些代谢物抑制胸苷酸合酶的活性更强，从而抑制细胞NA的合成，且能潴留在细胞内长时间发挥细胞毒作用。雷替曲塞具有疗效确切，副反应发生率低，方法简便，患者易于接受等优点。
1仪器与试剂
日本岛津ShimadzuLC-10A高效液相色谱仪，SP-10Avp UV-VIS etector，LC-10Avp两元泵，7725i手动进样阀；UV2450紫外分光光度计（日本岛津制作所；自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂，型号SZ一93。
甲醇（色谱纯，美国Fisher Scientific公司，乙醇（分析纯，济南元通化工有限公司，水为双重蒸馏水。
雷替曲塞对照品（河南天方药业股份有限公司药物研究所，批号为000752，含量100.0%和注射用雷替曲塞（河南天方药业股份有限公司药物研究所，批号为010804。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm，流动相：A（甲醇：B（0.15molL乙酸水溶液=42：58，检测波长：226nm，柱温：40℃，进样量：20μL，流速：0.9mLmin。在上述色谱条件下，雷替曲塞能够得到很好的分离。
2.2专属性考察精密称取雷替曲塞对照品适量，用流动相溶解并稀释成含雷替曲塞0.01（V：V的溶液，用紫外分光光度计在200-450nm范围内扫描，雷替曲塞在348nm处有最大吸收，故选取348nm为检测波长。
2.3线性关系取雷替曲塞对照品20mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，摇匀，备用。精密量取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，分别取20μL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：A=5.13×107C+3.10×104（r=0.9993，结果表明雷替曲塞在0.0125-0.0638mgmL之间呈良好的线性关系。
2.4精密度试验、稳定性试验取0.0495mgml对照品溶液，重复进样8次，记录峰面积，计算得RS=0.28%，表明精密度良好。
取0.0495mgml的供试品溶液1份，分别在2、4、6、8、10、12h进样20μL，记录峰面积并计算得RS=0.29%，结果表明样品溶液在12h内稳定。
2.5回收率试验取对照品适量，精密称定，配制成相当于0.0495mgml的80%、100%、120%的溶液分别进行测定，计算得平均回收率为99.12%，相对平均偏差（RS为0.56%（n=9。
2.6样品测定取注射用雷替曲塞5瓶，将其内容物混合均匀，精密称定，计算平均装量。取混合后的内容物适量（约相当于雷替曲塞2.5mg，精密称定，加流动相溶解并稀释至50ml，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取对照品适量，加流动相溶解并稀释制成0.05mgml的溶液，作为对照品溶液。上述对照品和供试品溶液分别进行测定，按外标法以峰面积计算样品的含量，结果为99.8%。
3讨论
笔者對流动相的系统组成进行了比较，分别使用甲醇-水、乙腈-水等，根据分离优化试验，在甲醇—水中加适量的乙酸使呈弱酸性能改善峰形及分离度，最终选取甲醇：0.15molL乙酸水溶液（42：58为流动相，雷替曲塞得到较好的分离，理论塔板数达3800，保留时间为7.9min。
参考文献
[1]TodrellI，NewellR，GibsonW，et al.The pharmacokinetics Of the quinazolineantifolateI CI1694 in mice and rats[J].Cancer Chemother Pharmacol，1991，28（5：33-338.
【关键词】雷替曲塞；HPLC；含量测定
雷替曲塞是一种用于治疗晚期结直肠癌和恶性胸膜间皮瘤的抗肿瘤药物。本品为高选择性抗代谢药物，是新一代水溶性胸苷酸合酶抑制剂，在体内被主动摄入细胞内，而后代谢为一系列多聚谷氨酸类化合物，这些代谢物抑制胸苷酸合酶的活性更强，从而抑制细胞NA的合成，且能潴留在细胞内长时间发挥细胞毒作用。雷替曲塞具有疗效确切，副反应发生率低，方法简便，患者易于接受等优点。
1仪器与试剂
日本岛津ShimadzuLC-10A高效液相色谱仪，SP-10Avp UV-VIS etector，LC-10Avp两元泵，7725i手动进样阀；UV2450紫外分光光度计（日本岛津制作所；自动双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂，型号SZ一93。
甲醇（色谱纯，美国Fisher Scientific公司，乙醇（分析纯，济南元通化工有限公司，水为双重蒸馏水。
雷替曲塞对照品（河南天方药业股份有限公司药物研究所，批号为000752，含量100.0%和注射用雷替曲塞（河南天方药业股份有限公司药物研究所，批号为010804。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：KromasilC18（250mm×4.6mm，5μm，流动相：A（甲醇：B（0.15molL乙酸水溶液=42：58，检测波长：226nm，柱温：40℃，进样量：20μL，流速：0.9mLmin。在上述色谱条件下，雷替曲塞能够得到很好的分离。
2.2专属性考察精密称取雷替曲塞对照品适量，用流动相溶解并稀释成含雷替曲塞0.01（V：V的溶液，用紫外分光光度计在200-450nm范围内扫描，雷替曲塞在348nm处有最大吸收，故选取348nm为检测波长。
2.3线性关系取雷替曲塞对照品20mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，摇匀，备用。精密量取1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，分别取20μL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：A=5.13×107C+3.10×104（r=0.9993，结果表明雷替曲塞在0.0125-0.0638mgmL之间呈良好的线性关系。
2.4精密度试验、稳定性试验取0.0495mgml对照品溶液，重复进样8次，记录峰面积，计算得RS=0.28%，表明精密度良好。
取0.0495mgml的供试品溶液1份，分别在2、4、6、8、10、12h进样20μL，记录峰面积并计算得RS=0.29%，结果表明样品溶液在12h内稳定。
2.5回收率试验取对照品适量，精密称定，配制成相当于0.0495mgml的80%、100%、120%的溶液分别进行测定，计算得平均回收率为99.12%，相对平均偏差（RS为0.56%（n=9。
2.6样品测定取注射用雷替曲塞5瓶，将其内容物混合均匀，精密称定，计算平均装量。取混合后的内容物适量（约相当于雷替曲塞2.5mg，精密称定，加流动相溶解并稀释至50ml，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取对照品适量，加流动相溶解并稀释制成0.05mgml的溶液，作为对照品溶液。上述对照品和供试品溶液分别进行测定，按外标法以峰面积计算样品的含量，结果为99.8%。
3讨论
笔者對流动相的系统组成进行了比较，分别使用甲醇-水、乙腈-水等，根据分离优化试验，在甲醇—水中加适量的乙酸使呈弱酸性能改善峰形及分离度，最终选取甲醇：0.15molL乙酸水溶液（42：58为流动相，雷替曲塞得到较好的分离，理论塔板数达3800，保留时间为7.9min。
参考文献
[1]TodrellI，NewellR，GibsonW，et al.The pharmacokinetics Of the quinazolineantifolateI CI1694 in mice and rats[J].Cancer Chemother Pharmacol，1991，28（5：33-338.