目的应用超高效液相色谱-质谱联用技术(ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC/MS)建立同时检测兔房水中可的松、皮质醇及皮质酮的方法。方法 24只新西兰白兔随机分为3组:对照组:玻璃体内注射0.1mL必施灌注液;曲安奈德组(TA组):玻璃体内注射0.1mL(4mg)TA;地塞米松组(DEX组):隔日(共15次)球结膜下注射0.1mL(0.5mg)地塞米松。在注射前,注射后1d、1周、2周、3周和4周检测兔眼眼压。在注射前和注射后第29天抽取房水,应用UPLC/MS检测可的松、皮质醇以及皮质酮的含量。结果注射后1d,TA组眼压(36.6±4.1)mmHg(1kPa=7.5mmHg)较对照组(15.3±2.5)mmHg明显上升,差异有显著统计学意义(P<0.01);首次注射后2周,DEX组眼压(20.7±3.6)mmHg较对照组(14.6±1.8)mmHg明显上升,差异也有显著统计学意义(P<0.01);TA组和DEX组造模成功。在建立的标准曲线中,可的松、皮质醇在0.16~100.00μg.L-1的浓度范围内线性良好(r>0.998),最低检测下限均为0.16μg.L-1;皮质酮最低检测下限为10.00μg.L-1。注射后TA组房水中可的松含量为(1.87±0.23)μg.L-1、皮质醇为(2.13±0.68)μg.L-1、皮质酮为(25.5±5.9)μg.L-1,测定含量均明显高于DEX组的(1.36±0.47)μg.L-1、(1.98±0.55)μg.L-1、(18.3±3.1)μg.L-1和对照组(均低于最低检测下限),差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论采用UPLC/MS可建立同时定量检测兔房水中可的松、皮质醇和皮质酮含量的方法,其灵敏度高,线性关系好。