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里氏木霉RUT-C30内切β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：HUAXIAHK

【摘 要】

：

以里氏木霉（Trichoderma reesei）RNA为模板，采用RT—PCR扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pPIC9K-man1，重组质粒SacⅠ线性化后用PEG（聚乙二醇）

【作 者】

：

陈小兵 乔宇 丁宏标 岳明 

【机 构】

：

中国农业科学院饲料研究所

【出 处】

：

农业生物技术学报

【发表日期】

：

2007年1期

【关键词】

：

里氏木霉 甘露聚糖酶 毕赤酵母 Trichoderma reesei  mannanase  Pichia pastoris 

【基金项目】

：

基金项目：国家高技术研究与发展计划（863）（No.2003AA241160）,国家自然科学基金项目（No.30371046）和国际科学基金IFS项目（No.B/3873-1）资助.

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以里氏木霉（Trichoderma reesei）RNA为模板，采用RT—PCR扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pPIC9K-man1，重组质粒SacⅠ线性化后用PEG（聚乙二醇）法导入毕赤酵母（Pichia pastoris）菌株GS115中，通过PCR和表型鉴定表明，man1基因已经整合到毕赤酵母染色体上。经大量筛选，获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株RMAN23。将此菌株在5L发酵罐中进行高密度发酵，测定酶活最高达470IU／mL，同时对重组甘露聚

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