【摘 要】
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为研究波形蛋白在病毒侵染过程中发挥的作用, 原核表达猪波形蛋白与病毒互感后检测其复制能力.根据GenBank中已发表的波形蛋白序列, 设计特异性引物, 从PK-15细胞中扩增波形
【机 构】
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西北民族大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730030中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;中国
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为研究波形蛋白在病毒侵染过程中发挥的作用, 原核表达猪波形蛋白与病毒互感后检测其复制能力.根据GenBank中已发表的波形蛋白序列, 设计特异性引物, 从PK-15细胞中扩增波形蛋白基因, 并将其克隆至pET-28a (+) 载体, 转化大肠埃希菌BL21进行原核表达, 表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后, 进行目的蛋白的纯化及复性, 并利用病毒抑制试验, 检测其在病毒感染过程中的作用.结果表明, 成功地克隆了猪波形蛋白基因, 并克隆至pET-28a (+) 载体, 经诱导后高效表达, 经纯化复性获得的波形蛋白抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 侵染Marc-145细胞, 然而并不抑制口蹄疫 (FMDV) 侵染PK-15细胞.随后借助细胞流式术检测PK-15细胞中波形蛋白的分布, 显示其主要存在于细胞膜内的基质中.猪源波形蛋白的克隆表达, 为进一步研究猪源波形蛋白与口蹄疫病毒蛋白之间的相互作用奠定了基础.
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