研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。
方法建立人肠上皮细胞株Caco－2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分，分别行缺氧处理0 h(即刻)及1、2、6、12、24 h，采用生物电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻(TER)。另取细胞同前行缺氧处理，采用蛋白质印迹法检测带状闭合蛋白1(ZO－1)、咬合蛋白、闭合蛋白1及Slingshot－1、Slingshot－2、Slingshot－3的蛋白表达。另取细胞同前行缺氧处理，采用荧光法检测纤维状肌动蛋白及球状肌动蛋白含量。3项检测中，各时相点样本数分别为10、10、18。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。
结果(1)与缺氧0 h比较，缺氧1～24 h细胞的TER值均明显降低(P值均小于0.01)。(2)与缺氧0 h(均为1.00)比较，缺氧1～24 h细胞的ZO－1、咬合蛋白及闭合蛋白1表达量普遍降低，于缺氧12 h或24 h达到最低值(分别为0.69±0.20、0.47±0.15、0.47±0.22，P<0.05或P<0.01)。与缺氧0 h比较，缺氧1～24 h细胞的Slingshot－1、Slingshot－3蛋白表达量无明显变化(P值均大于0.05)；缺氧1～24 h，细胞的Slingshot－2蛋白表达量呈先降低后上升的趋势，其中缺氧24 h(1.54±0.57)明显高于缺氧0 h(1.00，P<0.05)。(3)与缺氧0 h比较，缺氧1、6、12、24 h细胞的纤维状肌动蛋白含量明显减少，缺氧6～24 h细胞的球状肌动蛋白含量明显增加，P<0.05或P<0.01；其余时相点2项指标无明显变化(P值均大于0.05)。
结论缺氧通过诱导人肠上皮细胞Slingshot－2表达，引起丝切蛋白去磷酸化而活化以及纤维状肌动蛋白解聚，从而影响细胞间紧密连接，导致细胞屏障功能受损。