【摘 要】
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目的:建立真核表达载体pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌MDA-MB-231细胞系,观察4.1N在MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法:真核表达载体pEGFP-4.1N转化到大肠杆菌中进行扩增,酶切鉴
【机 构】
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郑州大学生物工程系,河南省医药科学研究院
【基金项目】
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国家大学生创新性实验基金资助项目;国家自然科学基金
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目的:建立真核表达载体pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌MDA-MB-231细胞系,观察4.1N在MDA-MB-231细胞中的表达和定位.方法:真核表达载体pEGFP-4.1N转化到大肠杆菌中进行扩增,酶切鉴定插入片段后进行测序.脂质体法将重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,经G418筛选抗性克隆,利用倒置荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的定位,并用Western blot检测融合蛋白的表达.结果:真核表达载体pEGFP-4.1N的酶切片段经琼脂糖电泳和测序鉴定结果正确.G418筛选14 d后获得pEGFP-4.1 N稳定转染的MDA-MB-231抗性克隆.荧光显微镜下观察到融合蛋白在MDA-MB-231阳性克隆的细胞质中表达.核内不表达.Western blot亦检测到4.1N融合蛋白的表达.结论:成功建立了pEGFP-4.1N稳定转染的乳痛细胞系MDA-MB-231阳性克隆.
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