HPV16 E_7基因克隆及其特异性鉴定

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根据已报导的HPV16E_7基因序列,设计了两个寡核苷酸引物,在引物的5′端分别引入了EcoRI和HindⅢ酶切位点,采用多聚酶链反应(PCR)扩增了HPV16E_7基因片段。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点与pUC18载体连接,重组质粒转化宿主菌JM109,在含X-gal、IPTG的平板上直接筛选,斑点杂交,PCR扩增鉴定和酶切分析证明得到了含HPV16E_7完整的编码序列的重组克隆。 According to the reported HPV16E7 gene sequence, two oligonucleotide primers were designed. The EcoRI and HindIII restriction sites were introduced into the 5 ’end of the primer. The HPV16E7 gene fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The recombinant plasmid was transformed into host strain JM109 by direct digestion with EcoRI and Hind Ⅲ restriction sites and pUC18 vector. The recombinant plasmid was directly screened on X-gal and IPTG plates. Dot blotting, PCR amplification and enzyme digestion analysis showed that HPV16E_7 Recombinant clone of the complete coding sequence.
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