【摘 要】
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根据U.Washington发表的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计一对引物含Nco Ⅰ、SalⅠ酶切位点,利用PCR的方法,扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒
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根据U.Washington发表的根癌土壤农杆菌(Agribacterium tumefaciens)C58Ti质粒基因序列,设计一对引物含Nco Ⅰ、SalⅠ酶切位点,利用PCR的方法,扩增了C58根癌土壤农杆菌Ti质粒毒性区蛋白Virl2基因,连接T载体经测序与发表的序列同源性达l00%.将目的片段从T载体上切下,连接至原核表达载体PET-30a上,转化E.coliDH5α,筛选出阳性克隆,提质粒转化E.coli BL2l,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳,发现与对照比较在近50kD处有特异条带,与理论大小(49.5kD)相符表明所克隆的VirD2基因获得了原核表达.
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