【摘 要】
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目的为探讨抑制人端粒酶的模板RNA成分(hTR)能否抑制人胰腺癌细胞的端粒酶活性及细胞生长能力.方法用分子克隆方法将593 bp 的hTR全长cDNA反向亚克隆到哺乳细胞表达载体pcDNA
【机 构】
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浙江大学医学院附属第一医院,Cornell University Medical College New York
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目的为探讨抑制人端粒酶的模板RNA成分(hTR)能否抑制人胰腺癌细胞的端粒酶活性及细胞生长能力.方法用分子克隆方法将593 bp 的hTR全长cDNA反向亚克隆到哺乳细胞表达载体pcDNA3.1(-)的多克隆位点上,以构建hTR反义表达质粒.酶切及序列分析证实此质粒为hTR反义表达质粒.此重组表达质粒与空质粒一起,通过脂质体法转导到人胰腺癌panc1细胞,并用G418筛选抗性克隆,所产生的稳定生长克隆用位于pcDNA3.1多克隆位点两侧的T7及GBH引物进行PCR扩增以证实外源hTR的存在.最后,对这些细胞的生长曲线、内源性hTR的表达、端粒酶活性及锚着非依赖性生长特性进行了分析.结果转导有反义hTR重组质粒的人胰腺癌细胞与转导空载体及未转导任何质粒的对照细胞相比,Northern Blot及RT-PCR方法证实其内源性hTR的表达明显下调,TRAP方法证实其端粒酶活性明显下降.而且,其细胞增殖速度和软琼脂集落形成能力亦较对照组细胞明显减慢.但没有观察到明显的细胞衰老或调亡现象.结论上述结果表明hTR 是人端粒酶复合物的关键组成部分,提示抑制端粒酶的hTR组分可能是抗肿瘤治疗的有效靶点.
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