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目的
研究Cas9蛋白结构与功能的关系，拆分蛋白是否互补具有完整的特异性切割功能，进一步为微小Cas9的蛋白转导、腺相关病毒载体构建奠定基础。
方法对S.pyogenes Cas9进行改造，在第715 Gly和716 Gln之间断开，构建了Cas9-1(1-715aa)和Cas9-2(716-1368aa)两部分拆分质粒，与HBB基因的sgRNA转染293T细胞，研究拆分后的蛋白是否具有切割活性。
结果高分辨率溶解曲线(HRM high resolution melting)结果证明，Cas9拆分蛋白可以在体内切割DNA, Tm值与对照组相差约0.5 ℃；T7E1突变检测证明，同时转染两部分Cas9拆分蛋白质粒和sgRNA质粒时具有完整Cas9的切割作用，将拆分Cas9一部分与sgRNA共表达后，效率为完整Cas9蛋白的50%。