探讨慢病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)基因表达对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤(PC12)细胞内质网钙稳态的影响及钙通道的调节机制。

取对数生长期的PC12细胞，分为重组慢病毒感染组〔感染含HSP70及绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒〕、慢病毒对照组(感染含GFP但不含HSP70基因的慢病毒)及未感染组。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测PC12细胞经缺血/缺氧处理4、8、12、24 h后的细胞活性，以选取最佳缺血/缺氧时间。采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测缺血/缺氧8 h时HSP70、肌质/内质网Ca²⁺-ATP酶亚型(SERCA2a、SERCA2b)、兰尼碱受体2(RyR2)、三磷酸肌醇受体1(IP3R1)的mRNA转录水平；采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测缺血/缺氧8 h时HSP70、SERCA、IP3R的蛋白表达水平；采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)及游离钙离子([Ca²⁺]i)水平。

随着缺血/缺氧时间延长，各组细胞活性呈先增强后减弱的趋势，均于8 h时达峰值。缺血/缺氧8 h时，重组慢病毒感染组细胞活性较未感染组和慢病毒对照组均明显升高〔A值(×10^-2)：20.3±2.2比14.1±2.1、15.0±1.6，均P<0.01〕，HSP70和SERCA的mRNA及蛋白表达均明显上调〔HSP70 mRNA(2^-ΔΔCt)为0.785±0.018比0.428±0.019、0.423±0.023，HSP70蛋白(灰度值)为2.72±0.20比1.56±0.36、1.63±0.41，SERCA2a mRNA(2^-ΔΔCt)为0.971±0.037比0.367±0.014、0.347±0.012，SERCA2b mRNA(2^-ΔΔCt)为8.869±0.162比3.015±0.091、2.941±0.091，SERCA蛋白(灰度值)为2.84±0.18比1.48±0.26、1.52±0.29〕，IP3R2的mRNA及蛋白表达均明显下调〔IP3R2 mRNA(2^-ΔΔCt)为0.183±0.020比0.439±0.020、0.433±0.040，IP3R2蛋白(灰度值)为1.15±0.12比1.91±0.20、1.83±0.19〕，差异均有统计学意义(均P<0.01)，而RyR1 mRNA表达差异无统计学意义〔2^-ΔΔCt(×10^-3)：1.97±0.63比2.02±0.22、2.01±0.09，均P>0.05〕；细胞内ROS及[Ca²⁺]i的荧光强度均显著降低(ROS为30.54±1.23比58.03±1.97、57.72±2.35，[Ca²⁺]i为34.50±2.05比48.20±3.02、46.80±2.75，均P<0.01)。

外源性HSP70能维持PC12细胞内质网钙稳态，对细胞内质网钙释放通道IP3R及肌质网钙泵SERCA调控Ca²⁺的通道蛋白具有显著影响，可能对缺血/缺氧引起的PC12细胞内损伤具有保护作用。