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目的 构建携带增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）标志针对大鼠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因的shRNA重组腺病毒载体并在人胚肾-293细胞中扩增制备重组病毒。方法利用AdMax包装系统，用先期构建的带有EGFP标记基因的穿梭质粒pDC316-iNOS—shRNA—EGFP，与骨架质粒pBHG1α—E1，3Cre共转染293包装细胞，同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-inos—shRNA—EGFP，反复感染293细胞扩增病毒后，离子交换法纯化病毒，并测定病毒颗粒数及滴度。结果经聚合酶链反应（PCR）检测和EGFP表达证明已成功构建了携带iNOS-shRNA—EGFP的重组腺病毒载体；扩增纯化后，测得重组腺病毒颗粒数为3．6×10^11VP／ml，A260／A280值约为1．25，病毒活性为7．94×10^9IU／ml。结论已成功构建重组腺病毒载体Ad5-inos—shRNA—EGFP，为利用基因激活技术治疗勃起功能障碍的研究奠定实验基础。