PPAR γ配体结合域的表达、纯化和鉴定

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提取MCF-7乳腺癌细胞的总RNA,通过RT-PCR技术扩增出hPPAR γ/LBD cDNA,并克隆于载体pGEX-1γ上,测序表明该序列与已报道序列相同,将其转入BL21(DE3)大肠杆菌中,IPTG诱导表达GST-hPPAR γ/LBD,在不同培养温度或IPTG诱导浓度下,GST-hPPAR γ/LBD以可溶或包涵体形式存在,表达产物经谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析纯化,可被抗hPPARγ多克隆抗体特异识别,并与其天然配体发生特异性结合.
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