【摘 要】
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为构建表达组织因子(TF)膜外区的融合载体,制备组织因子膜外区,抽提人胎盘组织的总RNA,通过RT-PCR法扩增出TF的cDNA克隆至pUC18并测定全序列.然后以此为模板,再次PCR扩增出TF
【机 构】
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上海医科大学华山医院检验科,中国科学院上海生物工程研究中心
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为构建表达组织因子(TF)膜外区的融合载体,制备组织因子膜外区,抽提人胎盘组织的总RNA,通过RT-PCR法扩增出TF的cDNA克隆至pUC18并测定全序列.然后以此为模板,再次PCR扩增出TF膜外区(soluble TF,sTF)cDNA,并将其插入到谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX 4T-1,构建了tac启动子控制下的GST-sTF融合蛋白的表达载体.表达的融合蛋白经亲和层析、凝血酶切得到纯化的sTF.表达产物经ELISA验证,能特异性地与TF抗体结合.重新脂化后,该产物具有较大凝血活性.以上说
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