【摘 要】
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目的扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因,将其克隆到T载体来构建T载体文库.方法收集乳腺癌患者外周转移淋巴结30例,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA,行RT-PCR扩增,制备T载体,用于PC
【机 构】
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第四军医大学西京医院肝胆外科,唐都医院信息科,第四军医大学基础部药理学教研室,西安交通大学第一医院血液科,第四军医大学基础部生物化学教研室
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目的扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因,将其克隆到T载体来构建T载体文库.方法收集乳腺癌患者外周转移淋巴结30例,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA,行RT-PCR扩增,制备T载体,用于PCR产物的克隆.结果总RNA纯度高,完整性好,mRNA获得率为1%.经RT-PCR,VH、Vλ、Vκ的每一条5＇端引物均与其相应的3＇端引物成功地扩增出了可变区基因片段,轻、重链T载体库分别为1.7×108和3.5×108.结论所采用的引物能够100%扩增目的片段,T载体过渡能显著提高克隆效率,为噬
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