款冬酮对过敏性鼻炎模型小鼠肥大细胞活性的抑制作用

来源 :山西医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:y871655121
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目的 探究款冬酮(tussilagone,TUS)对过敏性鼻炎模型(allergic rhinitis,AR)小鼠肥大细胞的抑制作用及其分子机制。方法 将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、TUJS组和Ly294002组,每组10只。AR小鼠模型采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)联合鼻腔滴注OVA方法构建。造模完成后第1~7天,TUS组小鼠按照5 ml/kg的剂量每天腹腔注射8×10-2 mol/L款冬酮药剂;Ly294002组小鼠每天腹腔注射6.0 mg/kg的PI3K/AKT信号通路抑制剂Ly294002溶液。采用HE染色检测小鼠鼻黏膜组织病理情况,Giemsa染色检测鼻黏膜组织嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润;采用ELISA法检测致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL4、IL-5和IFN-γ水平;流式细胞术检测小鼠脾脏组织CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞水平。Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。将RBL-2H3细胞分为对照组、模型组、款冬酮组(C-TUS组)和Ly294002组(CLy294002组)。采用100 ng/ml的DNP-IgE处理12 h致敏细胞后,C-TUS组细胞加入1μl浓度为8×10-2 mol/L的款冬酮处理2 h,C-Ly294002组细胞加入10μl浓度为25 mol/L的Ly294002溶液处理2 h。采用ELISA法检测β-己糖氨酸酶和组胺水平,采用Fura-2/AM钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度,Western blot分析PI3K、p-PI3K、PKB和p-PKB蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠鼻黏膜组织出现了大量炎性细胞浸润,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均增加;TUS组和Ly294002组小鼠鼻黏膜组织炎性浸润较模型组显著改善,肥大细胞和嗜酸性粒细胞数量均减少。与对照组比较,模型组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P<0.05),IFN-γ水平降低(P<0.05),脾脏组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例降低(P<0.01),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05);与模型组比较,TUS组和Ly294002组小鼠血清中致敏因子IgE、组胺、白三烯、IL4和IL-5的水平均降低(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),脾脏组织中CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+T细胞比例升高(P<0.05),鼻黏膜组织中PI3K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05);与TUS组比较,Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL-4和IL-5的水平均升高(P<0.01),IFN-γ水平降低(P<0.05),Ca2+内流强度增强(P<0.01),PI3K和PKB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05);与模型组比较,C-TUS组和C-Ly294002组RBL-2H3细胞中β-己糖氨酸酶、组胺、白三烯、IL4和IL-5的水平均降低(P<0.05),IFN-γ水平升高(P<0.05),Ca2+内流强度减弱(P<0.05),P13K和PKB蛋白磷酸化水平均降低(P<0.05);与C-TUS组比较,C-Ly294002组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 款冬酮通过抑制肥大细胞的活化和维持细胞免疫稳态,对过敏性鼻炎起到缓解作用,该机制可能与抑制P13K/PKB信号通路激活有关。
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